Lorsque vous testez l'effet du pH sur l'activité enzymatique, vous devez faire varier le pH. Cependant, vous pouvez le faire de bonnes ou de mauvaises manières. Gardez à l'esprit quels facteurs supplémentaires peuvent confondre les effets de la variation du pH. Sinon, les résultats obtenus peuvent ne pas être dus au changement de pH, mais à un autre facteur. Savoir comment faire varier correctement le pH et quels facteurs confondent le pH d'une expérience vous aidera à obtenir de bons résultats et à comprendre pourquoi vos résultats peuvent ne pas être exactement ce que vous attendiez.
Changer une seule chose
Lorsque vous testez l'effet du pH sur l'activité enzymatique, ne faites varier que le pH tout en maintenant les autres facteurs constants. Ces autres facteurs comprennent la concentration en enzymes, la concentration en substrat et la température. Les facteurs qui restent constants sont appelés les variables de contrôle. Les variables de contrôle vous permettent de conclure que les résultats sur l'activité enzymatique obtenus dans votre expérience sont dus à la variation du pH, la variable indépendante. Connaître les facteurs à ne pas changer dans une expérience est tout aussi important que savoir quel facteur varier, sinon, il sera difficile de conclure si les résultats sont réellement dus à la seule chose qui a été testé.
Choisissez un acide ou une base
Le pH d'une solution peut être modifié en dissolvant différentes quantités d'un acide ou d'une base dans l'eau. Une façon de tester l'effet du pH sur l'activité enzymatique est d'ajouter progressivement des gouttes d'un acide fort ou d'une base forte dans la solution qui contient l'enzyme, puis observez le point auquel l'activité enzymatique ralentit ou s'arrête. Un acide est défini comme un composé qui donne un ion hydrogène, appelé proton (H+), et une base est définie comme un composé qui donne un ion hydroxyde (-OH). Différents acides et bases ont un nombre différent de protons ou d'ions hydroxyde à céder. Tous les protons ou ions hydroxyde ne sont pas immédiatement donnés lorsqu'un acide ou une base est ajouté à une solution, mais le nombre de protons ou d'ions hydroxyde donnés modifie le pH à des vitesses différentes. Ainsi, c'est une bonne idée de faire varier le pH dans une expérience enzymatique en utilisant un seul type d'acide ou un seul type de base. Sinon, d'autres variables sont ajoutées par inadvertance.
Les tissus changent également le pH
Certaines expériences de laboratoire qui étudient l'activité enzymatique consistent à broyer du tissu frais pour libérer les enzymes des cellules, puis à ajouter un substrat pour mesurer l'activité enzymatique. Les tissus frais contiennent du sang. En raison de la présence d'enzymes dans le sang qui transforment le dioxyde de carbone gazeux dissous dans le sang en acide carbonique, le tissu lui-même peut affecter le pH. Ainsi, dans les expériences qui impliquent une activité enzymatique dans des tissus frais, il est utile de laver le sang dans un bécher d'eau froide avant de broyer le tissu. Cela minimisera le changement involontaire de pH dû au tissu, de sorte que le changement intentionnel de pH puisse être étudié.
Gardez les mêmes tailles
Comme discuté ci-dessus, la concentration enzymatique est un facteur de contrôle qui ne doit pas être modifié lors du test de l'effet du pH sur l'activité enzymatique. Cependant, les procédures expérimentales varient encore de manière inhérente la concentration en enzyme de manière subtile. Si l'on utilise une solution pure d'enzymes, alors maintenir la concentration d'enzymes constante. Cependant, dans les expériences dans lesquelles l'enzyme provient de tissus frais, tels que des morceaux de pomme de terre, des morceaux de plantes ou des morceaux de foie, la taille des morceaux modifie la quantité d'enzyme dans chaque tube à essai. Ainsi, il sera utile de couper les morceaux de tissu aussi uniformément que possible. Ceci est un autre exemple de la façon dont savoir ce qu'il ne faut pas changer, et pourquoi il est difficile de ne pas éviter complètement le changement, aide à interpréter les résultats de la variation d'un facteur tel que le pH.