Kun olet suorittanut DNA-näytteet agaroosigeelillä ja ottanut kuvan, voit tallentaa kuvan myöhempää käyttöä varten, jolloin voit analysoida tuloksia ja tulkita niitä. Etsimäsi tyypit riippuvat kokeesi luonteesta. Jos teet esimerkiksi DNA-sormenjälkiä, sinun kannattaa verrata DNA-palojen kokoa kahdesta näytteestä - epäiltystä ja rikospaikan näytteestä. Jos työskentelet bakteerien sisältämien plasmidien kanssa, saatat joutua sen sijaan varmistamaan, että plasmidi sisältää insertin. Näin ollen se, miten tulkitset geeliäsi, riippuu osittain tekemästäsi kokeesta. Voit kuitenkin soveltaa joitain yleisiä sääntöjä.
Huomaa, että sinun on ehkä tai ei tarvitse käyttää tämän osan ohjeita. Agaroosigeelielektroforeesia käytetään usein vahvistamaan, että plasmidi sisältää tietyn insertin. Jos et työskentele plasmidien kanssa, voit ohittaa tämän osan. Jos kuitenkin olet, voit noudattaa näitä ohjeita.
Huomaa, että jos työskentelet leikkaamattomien tai leimattujen plasmidien kanssa, et voi arvioida kokoa yllä olevan osan 1 menettelyn avulla. Tämä johtuu siitä, että leikkaamattomat ja leimatut plasmidit kulkeutuvat eri nopeuksilla kuin lineaarinen DNA.
Vertaa kaistojen nauhojen määrää. Muista, että restriktioentsyymi leikkaa DNA: ta kohdissa, joissa esiintyy tietty restriktiokohdaksi kutsuttu sekvenssi. Jos näytettä käsiteltiin KAHDELLA restriktioentsyymillä, molempien tulisi olla läsnä vyöhyke insertille ja kaista loppuosan plasmidille. Tämä johtuu siitä, että inserttiä reunustaa kaksi restriktiokohtaa, kukin eri entsyymille, joten leikkeet molemmissa näistä kohdista vapauttavat insertin plasmidista. Leikkaus vain yhdessä paikassa muuntaa plasmidin lineaariseksi DNA: ksi. Näytteessä, joka on leikattu ilman restriktioentsyymejä tai yhtä restriktioentsyymiä, tulisi sitten olla yksi vyöhyke, kun taas näytteellä, joka on leikattu kahdella restriktioentsyymillä, tulisi olla kaksi vyöhykettä.
Varo litteän plasmidi-DNA: n luomia vyöhykkeitä. Leikatulla plasmidilla on leikkaus vain yhdessä juosteessa, joten se kulkeutuu hitaammin kuin leikattu plasmidi. Leikatut plasmidit puolestaan liikkuvat hitaammin kuin leikkaamaton DNA.
Arvioi insertin koko kappaleessa 1 kuvatulla tavalla ja määritä, vastaako se odotuksiasi (joka vaihtelee kokeesta riippuen).
Tarvittavat asiat
- Lyijykynä
- Paperi
- Laskentataulukko-ohjelma
- Kuva geelistäsi
- Viivotin