Tiitterin laskeminen virukselle on monimutkainen tapa sanoa, että tutkija laskee virusten määrän tietyssä näytteessä. Virustitterien laskemiseksi tutkijat infektoivat kasvavien bakteerien levyt virusliuoksilla vaihtelevilla pitoisuuksilla ja selvittää virusten määrä alkuperäisessä liuoksessa laskemalla viruksen aiheuttamat kuolleet bakteerit infektio.
Laita käsineet päälle, täytä 10 viljelyputkea 9 ml: lla liemiä ja merkitse ne "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" ja niin kunnes "10 ^ -10". Näitä putkia käytetään virusten sarjalaimennuksiin, joita käytetään faagin laskemiseen titeri. Koska virukset voivat kasvaa uskomattoman korkeiksi pitoisuuksiksi, sinun on laimennettava ne, jotta ne voidaan laskea tehokkaasti. Jokainen putki edustaa viruksen 10-kertaista laimennosta.
Ota 1 ml sekoitettua viljelmää putkestasi, jossa on merkintä ”10 ^ -1”, ja siirrä se uudella pipetillä seuraavaan putkeen, jossa on merkintä ”10 ^ -2”. Sekoita myös tämä putki.
Luo sarjalaimennussarja jatkamalla tätä mallia. Tulet lopulta yhdeksään 9 ml: n putkeen ja yhteen 10 ml: n putkeen. Putkiesi viruskuormat laimennetaan 10 kertaa (ensimmäinen putki) tai 100 kertaa (toinen putki) kymmeneen miljardiin kertaan (viimeinen putki).
Lisää kaksi tippaa bakteeriviljelmää agariin ja sekoita se varovasti. Nämä tappavat bakteerit antavat sinun laskea viruspartikkeleiden määrä tietyssä liuoksessa.
Lisää 1 ml kutakin sarjalaimennosta vastaavaan agariputkeen, kun putket ovat vielä kuumavesihauteessa. Esimerkiksi 1 ml 10 ^ -1-sarjan laimennosta tulisi mennä agar-putkeen, jossa on merkintä "10 ^ -1".
Sekoita kukin putki ja kaada sitten jokainen putki vastaavalla etiketillä varustettuun Petri-levyyn. Tämä luo ohut kerros agaria, johon on siirretty bakteereja ja viruksia kullekin levylle. Anna levyjen kasvaa yön yli inkubaattorissa.
Ota levyt inkubaattorista ja tutki ne. Sinun pitäisi nähdä pilvisiä alueita koko levyllä, jossa bakteerit ovat kasvaneet, lukuun ottamatta pieniä kirkkaita pisteitä, joita kutsutaan plakkeiksi. Nämä plakit ovat kuolleiden bakteerien laastareita, ja jokainen plakki edustaa yhtä virusta.
Ota levyyn sisältyvien plakkien määrä ja kerro se 10: llä. Jos laskisit 157 plakkia, saat 1570.
Kerro edellisessä vaiheessa saamasi numero käänteisellä laimennusputkesi numerolla. Esimerkiksi, jos valitsemasi levy oli 10 ^ -5 levy, kerrotaan 1570 luvulla 10 ^ 5 saadaksesi arvon 157000000. Tämä viimeinen numero on faagitiitterisi ja edustaa virusten määrää / ml alkuperäistä viljelmääsi.