Teadlased kasutavad voolutsütomeetriat erinevat tüüpi rakkude või mikroskoopiliste organismide eristamiseks. See on tööriist, mida kasutatakse paljudes rakendustes, näiteks meditsiiniline diagnostika või kohtuekspertiis. Ehkki seda eksperimentaalset tehnikat on üsna lihtne teostada, on saadud keerukate andmete analüüs voolutsütomeetri abil on mitme eksperimentaalse teguri ja / või tsütomeetri tõttu keerulisem parameetrid. Sellisena on tavapärane, et tsütomeetrilisi andmeid visualiseeritakse ja analüüsitakse selliste keerukate professionaalsete programmide abil nagu CELLQuest või FlowJo. Nende tulemuste mõistmiseks on vajalik voolutsütomeetria tehnikate, masinate ja tarkvara tundmine katsed.
Selgitage katse eesmärki, küsides: "Mida uuriti või hüpoteesi uuriti?" See saab olema statistiliste tsütomeetriate abil täiendavate analüüside jaoks vajalike algtulemuste kohandamiseks sobiva vormingu ja sätetega tarkvara. Andmete kuvamiseks vastavate seadistustega (nt positiivsed rakud, negatiivsed väravad, fluorestsentsi intensiivsus, rakupopulatsioonid jne) tehke kõik vajalikud muudatused.
Leia väravad. Rakke saab rühmitada või lihtsalt vaadelda rühmitatuna tihedusgraafikul või kontuurdiagrammil. Grupid eralduvad sageli sõltuvalt nende identiteedist. Kui üks rühm värvub konkreetse markeri või antikeha suhtes väga intensiivselt, järeldatakse, et selle rühma liikmetel on kõigil konkreetse rakutüübi identiteet, mis seda markerit ekspresseerib. On tavaline, et leitakse rakud, mis on positiivsed rohkem kui ühe sellise markeriga, ja need rakud on tavaliselt vaheproduktid ja tähistatud kui "topelt-positiivsed".
Vaadake hajutatavaid graafikuid. See, kuidas rakurühmad hajutatuna hajuvad, näitab rakkude suurust. Väga suurte või kõrgete hajutitega rakud on tavaliselt suured rakud; need võivad aga olla suured lihtsalt seetõttu, et sisaldavad suurt osa tsütoplasmast, või võivad olla suured, kuna neil on väga suur tuum. Sõltuvalt uuritavast bioloogiast varieerub see eksperimentide vahel muidugi suuresti.
Vaadake numbreid. Reguleerige graafikuid nii, et ühel teljel (tavaliselt X-teljel) kuvatakse erinevad parameetrid, hoides samal ajal Y-telje loendusi. See näitab valimi populatsiooni osakaalu, mis on selle konkreetse parameetri jaoks positiivne, kui a piiki täheldatakse tavaliselt positiivselt värvitud proovis, mis negatiivsest kontrollist puudub proov.
Vaadake mitme parameetriga histogramme. Reguleerides X-telge ja Y-telge, on mõlemad erinevad parameetrid, mis olid eksperimendi käigus uuritud omadustest on võimalik sügavamalt aru saada valimi. Näiteks X-telje punase fluorestsentsi ja Y-telje rohelise fluorestsentsi seadistamise korral saab kvadrandilaadseid väravaid arvutada proov, et näidata kvadrandi nelja piirkonda, kus rakud on olemas ja värvitud kas punase või rohelise fluorestsentsi jaoks, mõlemad värvid või kõik. See võimaldab heterogeense proovi jagada selle komponentideks ja visualiseerida ning kvantifitseerida kõik kattuvad üksused.
Viited
- „Voolutsütomeetria andmete analüüs”; Susan Sharrow; 1991
- „Voolutsütomeetria: mõõteriistad ja andmete analüüs”; Marvin Van Dila; 1985
- „Voolutsütomeetriaprotokollid”; Teresa ja Robert Hawley; 2004
Autori kohta
Palmer Owyoung on omandanud San Diegos asuvas California ülikoolis rahvusvahelise äri magistrikraadi ja a Sotsioloogia bakalaureus Santa Barbaras Californias ja on koolitatud molekul bioloog. Ta on olnud vabakutseline kirjanik alates 2006. aastast. Lisaks kirjutamisele on ta täiskohaga Forexi kaupleja ja Interneti-turundaja.
Foto autorid
Polka Dot RF / Polka Dot / Getty Images