Kui olete agaroosigeelil DNA-proovid käivitanud ja pildi teinud, saate pildi hilisemaks ajaks salvestada, millal saate tulemusi analüüsida ja neid tõlgendada. Otsitavate asjade tüübid sõltuvad teie katse laadist. Kui teete näiteks DNA sõrmejälgi, siis võiksite võrrelda DNA proovide suurust kahest proovist - võib-olla kahtlustatavast ja kuriteopaigast. Kui töötate bakteritest saadud plasmiididega, peate võib-olla veenduma, et plasmiid sisaldab inserti. Järelikult sõltub see, kuidas te oma geeli tõlgendate, osaliselt teie tehtud katsest. Sellegipoolest on mõned üldreeglid, mida saate rakendada.
Pange tähele, et peate võib-olla kasutama selles jaotises olevaid juhiseid. Agaroosgeeli elektroforeesi kasutatakse sageli selle kinnitamiseks, et plasmiid sisaldab antud inserti. Kui te ei tööta plasmiididega, võite selle jaotise vahele jätta. Kui siiski olete, võite järgida neid juhiseid.
Pange tähele, et kui töötate lõikamata või hambumusega plasmiididega, ei saa te suurust hinnata ülaltoodud jaotises 1 toodud protseduuri abil. Seda seetõttu, et lõikamata ja hüüdnimega plasmiidid migreeruvad lineaarsest DNA-st erineva kiirusega.
Võrrelge ribade arvu igas sõidureas. Tuletame meelde, et restriktsiooniensüüm lõikab DNA saitides, kus esineb antud restriktsioonikohaks nimetatud järjestus. Kui proovi töödeldi KAHTE restriktsiooniensüümiga, peaksid mõlemad olema nii inserdi jaoks kui ka ülejäänud plasmiidi jaoks. Seda seetõttu, et inserti ääristavad kaks restriktsioonisaiti, millest igaüks on eri ensüümi jaoks, nii et mõlema nimetatud saidi lõiked vabastavad inserdi plasmiidist. Ainult ühes kohas tehtud lõikamine muudab seevastu plasmiidi lineaarseks DNA-ks. Proovilõikel, millel ei ole restriktsiooniensüüme või ühte restriktsiooniensüümi, peaks olema üks riba, samas kui kahe restriktsiooniensüümiga lõigatud proovil peaks olema kaks riba.
Pange tähele hüüdnimega plasmiidi DNA loodud ribasid. Hüüdnimega plasmiidil on lõigatud ainult üks ahel, seega migreerub see aeglasemalt kui lõigatud plasmiid. Lõigatud plasmiidid rändavad omakorda aeglasemalt kui lõikamata DNA.
Hinnake sisestuse suurust jaotises 1 kirjeldatud protseduuri abil ja tehke kindlaks, kas see vastab teie ootustele (mis varieeruvad sõltuvalt katsest).
Asjad, mida vajate
- Pliiats
- Paber
- Arvutustabeli programm
- Teie geeli pilt
- Valitseja