Vedelat toitainepuljongit kasutatakse selliste bakterite nagu Escherichia coli kultiveerimiseks. Selle puljongi retseptid varieeruvad sõltuvalt bakteriliigist ja geneetiliste modifikatsioonide olemasolust, näiteks antibiootikumiresistentsusest. Puljongit saab tahkestada agari lisamisega, mis võimaldab bakteritel moodustada eraldiseisvaid kolooniaid, vedelkultuuris aga lihtsalt hajuvad kogu mahu ulatuses. See on põhiline, kuid hädavajalik tehnika selliste täiustatud meetodite jaoks nagu geenikloonimine või mikrobioloogilised analüüsid. Selles artiklis eeldatakse, et standardsed laboratoorsed Escherichia coli tüved tuleb kultiveerida Luria puljongi (LB) agarplaatidel (või Petri tassidel).
Kaalutakse välja 10 grammi bakteriaalset trüptooni, 5 grammi pärmiekstrakti, 5 grammi naatriumkloriidi, 15 grammi agarit või agaroosi ja 1 milliliiter 1 N naatriumhüdroksiidi. Segage neid mahuga destilleeritud ja autoklaavitud steriilset vett, kuni saadakse 1 liiter keskkonda. Autoklaavige meedium 25 minuti jooksul vabalt korgitud pudelites või kolbides. Enne kõrgel kuumusel hävinevate reaktiivide, näiteks antibiootikumide või muude toidulisandite lisamist laske jahtuda umbes 50 kraadini.
Laske autoklaavitud söötmel jahtuda temperatuurini 50 kraadi ja mitte alla 45 kraadi, kuna agar asetub enne mahavalamist mahutisse. Hankige steriilsed Petri tassid ja valage nii palju, et see kataks kogu plaadi pinna ja vähemalt poole selle sügavusest. Vältige plaatide ületäitumist ja eelistatavalt ärge lubage agaril nõude ülemise servaga kokku puutuda. Lase plaatidel tahkuda steriilses keskkonnas (nt laminaarse voolu kapoti all), jättes kaaned maha ja kapoti nurka.
Kuivatage plaadid. Kuigi plaate saab kasutada kohe pärast nende kinnitamist, on agari pinnal niiskust, mis takistab bakterikolooniate piisavat kleepumist. Seetõttu on kõige parem plaadid enne bakterite pealekandmist kuivatada, jättes need näiteks istuma toatemperatuur paar päeva või pool tundi laminaarse voolu kapoti all või 37 kraadi Celsiuse järgi inkubaator.
Hoidke plaate. Kuivatatud plaadid tuleks kaantele tagurpidi (tagurpidi) laduda ja tagasi oma algsele kohale pakendatud, kinni teibitud ja valguse eest kaitsmiseks fooliumisse pakendatud või sobivasse pakendisse konteiner. Kirjutage plaatidele alati valmistamise kuupäev ja vältige kasutamist, kui plaadid on vanemad kui 2 kuud.
Viited
- "Molekulaarbioloogia praegused protokollid"; Karen Elbing ja Roger Brent; 2002
Näpunäited
- Tehke võimalikult palju ülaltoodud etappe (eelistatult kõik) steriilses keskkonnas (nt lahtine leek või laminaarne vooluhulk), et takistada õhus levivate bakteriaalsete saasteainete sattumist ja kasvamist meedia.
Autori kohta
Palmer Owyoung on omandanud San Diegos asuvas California ülikoolis rahvusvahelise äri magistrikraadi ja a Sotsioloogia bakalaureus Santa Barbaras Californias ja on koolitatud molekul bioloog. Ta on olnud vabakutseline kirjanik alates 2006. aastast. Lisaks kirjutamisele on ta täiskohaga Forexi kaupleja ja Interneti-turundaja.
Foto autorid
Jupiterimages / Comstock / Getty Images