Viiruse tiitri arvutamine on keeruline viis öelda, et teadlane loeb viiruste arvu konkreetses proovis. Viirusetiitrite arvutamiseks nakatavad teadlased kasvavate bakterite plaate viiruslahustega erineva kontsentratsiooniga ja selgitage välja viiruste arv algses lahuses, lugedes kokku viiruse tõttu surnud bakterid infektsioon.
Pange kindad kätte, täitke 10 kultuurituubi 9 ml puljongiga ja sildistage need „10 ^ -1”, „10 ^ -2”, „10 ^ -3” ja nii edasi kuni „10 ^ -10”. Neid torusid kasutatakse faagi arvutamiseks kasutatavate seerianumbriliste lahjenduste jaoks tiiter. Kuna viirused võivad kasvada uskumatult suureks kontsentratsiooniks, peate tõhusaks loendamiseks neid lahjendama. Iga tuub tähistab viiruse kümnekordset lahjendust.
Võtke 1 ml segukultuuri oma katseklaasist, millel on silt “10 ^ -1”, ja viige see uue pipetiga järgmisse katseklaasi, mille silt on “10 ^ -2”. Segage ka see toru.
Jätkake seda mustrit seerialahjenduse sarja loomiseks. Lõpuks saate 9 tuubi 9 ml ja 1 tuubi 10 ml. Teie tuubide viiruskoormused lahjendatakse vahemikus 10 korda (teie esimene tuub) või 100 korda (teie teine tuub) kuni kümme miljardit korda (teie viimane tuub).
Lisage oma agarile kaks tilka bakterikultuuri ja segage seda ettevaatlikult. Need on bakterid, mis tapetakse, mis võimaldab teil loendada viiruse osakeste arvu konkreetses lahuses.
Kui katseklaasid on veel kuumaveevannis, lisage 1 ml igast lahjendusest vastavasse agaritorusse. Näiteks peaks 1 ml teie 10 ^ -1 seerialahjendust minema agaritorusse sildiga "10 ^ -1".
Segage kõik tuubid ja valage seejärel kõik torud vastava sildiga Petri plaadile. Nii tekib õhuke kiht agarit, kuhu on nakatatud bakterid ja viirused igasse plaati. Laske plaatidel inkubaatoris üleöö kasvada.
Võtke plaadid inkubaatorist välja ja uurige neid. Kogu plaadil peaksite nägema pilves kohti, kus bakterid on kasvanud, välja arvatud väikesed selged laigud, mida nimetatakse naastudeks. Need naastud on surnud bakterite laigud ja iga naast esindab ühte viirust.
Võtke plaadil olevate tahvlite arv ja korrutage 10-ga. Kui loeksite 157 tahvlit, saaksite 1570.
Korrutage eelmises etapis saadud arv lahjendustoru numbri pöördarvuga. Näiteks kui teie valitud plaat oli 10 ^ -5, korrutaksite 157000000 saamiseks 1570 10 ^ 5-ga. See viimane number on teie faagi tiiter ja tähistab viiruste arvu teie algkultuuri milliliitri kohta.
