Kui testite pH mõju ensüümide aktiivsusele, peaksite pH-d muutma. Kuid saate seda teha nii headel kui halbadel viisidel. Pidage meeles, millised lisategurid võivad erineva pH mõju segada. Vastasel juhul ei pruugi saadud tulemused olla tingitud pH muutusest, vaid mõnest muust tegurist. Teadmine, kuidas pH-d õigesti muuta ja millised tegurid segavad katse pH-d, aitab teil saada häid tulemusi ja mõista, miks teie tulemused ei pruugi olla täpselt sellised, nagu ootasite.
Muuda ainult ühte asja
PH mõju ensüümi aktiivsusele testimisel muutke ainult pH-d, hoides teisi tegureid konstantsena. Need muud tegurid hõlmavad ensüümi kontsentratsiooni, substraadi kontsentratsiooni ja temperatuuri. Konstantseteks jäävaid tegureid nimetatakse kontrollmuutujateks. Kontrollmuutujad võimaldavad teil järeldada, et teie katses saadud ensüümi aktiivsuse tulemused tulenevad sõltumatu muutuja pH varieerumisest. Teadmine, milliseid tegureid ei tohi katses muuta, on sama oluline kui teadmine, millist tegurit muuta, vastasel juhul on raske järeldada, kas tulemused on tegelikult tingitud ühest asjast testitud.
Valige üks hape või üks alus
Lahuse pH-d saab muuta, lahustades vees erinevad kogused hapet või alust. Üks viis pH mõju ensüümi aktiivsusele testimiseks on tugeva happe või tugeva aluse tilkade järkjärguline lisamine ensüümi sisaldavasse lahusesse ja seejärel jälgige punkti, kus ensüümi aktiivsus aeglustub või peatub. Hapet määratletakse kui ühendit, mis annetab vesinikiooni, nimetatakse prootoniks (H +), ja alust määratletakse ühendina, mis annetab hüdroksiidi iooni (-OH). Erinevatel hapetel ja alustel on eraldamiseks erinev arv prootoneid või hüdroksiidi ioone. Kõiki prootoneid ega hüdroksiidi ioone ei annetata kohe, kui lahusele lisatakse hapet või alust, kuid annetatud prootonite või hüdroksiidi ioonide arv muudab pH-d erineva kiirusega. Seega on hea mõte muuta ensüümkatses pH-d, kasutades ainult ühte tüüpi happeid või ühte tüüpi aluseid. Vastasel juhul lisatakse tahtmatult muid muutujaid.
Koed muudavad ka pH-d
Mõned laboratoorsed katsed, mis uurivad ensüümi aktiivsust, hõlmavad värske koe peenestamist, et ensüümid rakkudest vabaneda, ja seejärel ensüümi aktiivsuse mõõtmiseks substraadi lisamist. Värske kude sisaldab verd. Kuna veres on lahustunud gaasilist süsinikdioksiidi süsinikhappeks muutvaid ensüüme, võib kude ise mõjutada pH-d. Seega on katsetes, mis hõlmavad ensüümide aktiivsust värskes koes, enne koe jahvatamist vere pesta keeduklaasis külma veega. See minimeerib koest tingitud soovimatu pH muutuse, nii et saab uurida sihipärast pH muutust.
Hoidke suurused samad
Nagu eespool arutletud, on ensüümi kontsentratsioon kontrollfaktor, mida ei tohiks pH mõju ensüümi aktiivsusele testimisel muuta. Kuid katseprotseduurid muudavad oma olemuselt ensüümi kontsentratsiooni peenelt. Kui kasutatakse puhast ensüümide lahust, hoides ensüümi kontsentratsiooni konstantsena. Katsetes, kus ensüüm pärineb värskest koest, näiteks kartulitükkidest, taime- või maksatükkidest, muudab tükkide suurus ensüümi kogust igas katseklaasis. Seega on abiks koetükkide lõikamine võimalikult ühtlaselt. See on veel üks näide sellest, kuidas teadmine, mida ei tohi muuta, ja miks on raske muutusi täielikult vältida, aitab tõlgendada sellise teguri nagu pH väärtusi.