Tris, o tris (hidroximetil) aminometano, es un tampón biológico común que se utiliza en todo el proceso de extracción de ADN. Durante la extracción de cualquier número de fuentes, el ADN es sensible al pH. Durante la lisis celular, la eliminación de componentes celulares no deseados y la precipitación, se usa tris para mantener un pH estable. Además, juega un papel particularmente importante en la lisis celular.
TL; DR (demasiado largo; No leí)
La extracción de ADN es un proceso sensible al pH y el uso de un tampón tris ayuda a mantener el pH estable durante la lisis y extracción celular.
Tris como amortiguador
Dado que el pH puede influir y ser influenciado por una serie de factores celulares, mantener un pH estable es esencial para la ciencia experimental. Los tampones biológicos, como los tris, son importantes porque pueden mantener un pH estable a pesar de las influencias que de otro modo podrían cambiar el pH. El tris (hidroximetil) aminometano, con un pKa de 8,1, es un tampón eficaz entre pH 7 y 9. Debido a su rango neutro, tris es un tampón de uso común en los laboratorios biológicos. Sin embargo, el tampón tris es sensible a la temperatura y debe usarse a la temperatura a la que originalmente se midió el pH para evitar imprecisiones.
Lisis de células
La lisis, o romper las células, es el primer paso de la extracción de ADN. Esto se logra mediante un tampón que contiene tris y EDTA (ácido etilendiaminotetraacético). El EDTA se une a cationes divalentes como calcio y magnesio. Dado que estos iones ayudan a mantener la integridad de la membrana celular, eliminarlos con EDTA desestabiliza la membrana. Tris es el principal componente de almacenamiento en búfer; su función principal es mantener el pH del tampón en un punto estable, generalmente 8.0. Además, tris probablemente interactúa con el LPS (lipopolisacárido) en la membrana, lo que sirve para desestabilizar la membrana más.
Tris protege el ADN de los cambios de pH
Cuando las células se rompen, su ADN y su contenido se derraman en el búfer. Además, a menudo se incluyen RNasa A (destruye el ARN), proteasas (destruye proteínas) y SDS (dodecilsulfato de sodio, que solubiliza los fragmentos de membrana). En conjunto, esta sopa de contenido celular y ARN y proteínas fragmentados puede tener un gran impacto en el pH de la solución. Debido a que el ADN es sensible al pH, es importante que tris amortigüe la sopa y mantenga el pH en un punto estable.
Precipitación de ADN
En la etapa final de la extracción de ADN, el propio ADN se extrae de la solución. En este punto, el ADN es soluble en el tampón. Para extraer de la solución, el ADN se vuelve insoluble agregando etanol o isopropanol (alcohol isopropílico). Cuando se hace esto, el ADN se vuelve obvio en solución como una sustancia blanca filiforme. Aunque el ADN puede aislarse de los componentes celulares restantes de esta manera, no es "utilizable" cuando es insoluble. Después del aislamiento, se elimina el alcohol y el ADN debe devolverse a un tampón biológico, como tris, para su uso.
Hazlo tu mismo
Aunque la extracción de ADN se realiza comúnmente en laboratorios de investigación, generalmente se utiliza uno de varios kits disponibles comercialmente, cualquiera puede hacer la extracción de ADN en casa utilizando artículos domésticos comunes y ecológicos guisantes o espinacas. En este caso, ni tris, ni ningún tampón biológico, está presente para proteger el ADN de los cambios de pH. Sin embargo, es una forma visual de ayudar a los estudiantes a conectarse con el ADN celular.
