La clonación de TA es un método simple y conveniente para subclonar productos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). "TA" es la abreviatura de "timina" y "adenina". Esta técnica de clonación utiliza la capacidad de la timina para hibridar con adenina en presencia de ligasas. No se utilizan enzimas de restricción, a diferencia del método de subclonación tradicional. En cambio, los productos de la PCR se amplifican utilizando enzimas polimerasas Taq.
Método
El método de clonación TA utiliza la actividad de transferasa terminal de cierto saliente de ácido desoxirribonucleico en cada extremo del producto de PCR.
Se usa un vector de clonación linealizado con salientes simples de tres primos-T (3'-T), llamado vector T, para clonar este producto de PCR en un vector plasmídico. El producto de PCR se mezcla con este vector en alta proporción.
Se agrega ADN ligasa (ligasa T4) a la mezcla, lo que permite que los dos productos se hibriden y se unan.
Ventajas y desventajas
La clonación de TA es un método conveniente para subclonar productos de PCR en el vector linealizado, y es mucho más simple y rápido que los métodos de subclonación tradicionales. Debido a que este método no usa enzimas de restricción, se pueden clonar productos sin sitios de enzimas de restricción.
Una desventaja es que los kits de clonación TA son muy caros y, por tanto, su uso es limitado. Además, no hay clonación direccional; por lo que la probabilidad de clonación en dirección opuesta es mayor.
Kits de clonación TA
Varios fabricantes venden kits de clonación TA. Algunos son Invitrogen, QIAGEN y Premier Biosoft.
