Las bacterias se cultivan en placas de Petri en un medio sólido conocido como agar bacteriano, donde se forman colonias circulares elevadas. A diferencia de una célula bacteriana individual, una colonia es un grupo de bacterias lo suficientemente grande como para ser visible a simple vista. El crecimiento bacteriano se puede medir mediante la simple observación de cuántas colonias están presentes; sin embargo, los métodos más cuantitativos incluyen el uso de una cámara de recuento o, más a menudo, recuentos en placa viables. Este último se utiliza con mayor frecuencia, ya que también proporciona información cualitativa, como el efecto de las diferentes condiciones de crecimiento. Dado que puede haber miles de millones de bacterias en una placa de Petri, la medición primero requiere diluir la muestra para que sea posible contar el número de colonias.
En un tubo de ensayo, agregue 10 microlitros del cultivo bacteriano inicial a 90 microlitros de medio de dilución. Cierre la tapa del tubo firmemente y agite suavemente para obtener una mezcla homogénea. Ahora la muestra es una décima parte de su concentración original.
Transfiera 10 microlitros de esta nueva muestra a un nuevo tubo de ensayo que contenga 90 microlitros de medio de dilución, mezcle nuevamente. Una vez más, el resultado será la muestra más diluida, ahora será una centésima parte de su concentración original. Repita esto varias veces, hasta que la muestra original se haya diluido entre 104 y 1010 veces. Asegúrese de que cada tubo esté etiquetado con la dilución correcta, por ejemplo 10-1, 10-2 y así.
Dispense 10 microlitros de la última dilución completa en la placa de agar. Usando el borde de extensión, distribuya la solución bacteriana por toda la superficie de la placa de agar. Repita esto para dos platos más. También es común realizar estos pasos con otros niveles de dilución para comparar. Asegúrese de etiquetar la parte inferior de los platos. Vuelva a colocar las tapas en cada placa y deje que las placas de agar se sequen durante varios minutos en una mesa de laboratorio debajo de una llama o en una incubadora. Coloque las placas en la incubadora, que debe ajustarse a la temperatura adecuada para la cepa de bacterias. Deja que crezca de 12 a 16 horas.
Las colonias deben ser visibles después de 16 horas; sin embargo, algunas modificaciones genéticas pueden requerir más tiempo (por ejemplo, desarrollo del color). Cuando las colonias sean observables, saque las placas y busque las que tengan entre 30 y 300 colonias. Con un marcador permanente, coloque un punto en la parte inferior de la placa de Petri, el lado con el agar, no la tapa, donde sea que se vea una colonia a través del agar. Cuente cada punto del marcador. Repita para cada plato.
Para medir la cantidad de bacterias en el cultivo inicial para este experimento, la dilución debe invertirse en los cálculos, en dos lugares. En primer lugar, cuando tomó un microlitro del tubo de ensayo para colocarlo en la placa de Petri, tomó una décima parte de la muestra diluida, por lo que debe multiplicar todo por 10 para revertir eso. Además, si el factor de dilución en el tubo de ensayo fue, por ejemplo, 10-7, entonces el número de colonias debe multiplicarse por 107 para revertir el efecto de dilución. Simplemente elimine el signo negativo del exponente en los cálculos. Usa la fórmula:
[Número de colonias contadas] × 10 × [cuántas veces se debe multiplicar la muestra para llegar a la concentración original: por ejemplo, 105] = Número de unidades formadoras de colonias (UFC) por mililitro de cultivo inicial. Este es el crecimiento bacteriano en sus placas de Petri.
