Cuando pruebe el efecto del pH sobre la actividad enzimática, debe variar el pH. Sin embargo, puede hacer esto de buena o mala manera. Tenga en cuenta qué factores adicionales pueden confundir los efectos de la variación del pH. De lo contrario, los resultados obtenidos pueden no deberse al cambio de pH, sino a algún otro factor. Saber cómo variar correctamente el pH y qué factores confunden el pH de un experimento lo ayudará a obtener buenos resultados y comprender por qué sus resultados pueden no ser exactamente los que esperaba.
Cambiar solo una cosa
Cuando pruebe el efecto del pH sobre la actividad enzimática, varíe solo el pH mientras mantiene constantes los demás factores. Estos otros factores incluyen concentración de enzima, concentración de sustrato y temperatura. Los factores que permanecen constantes se denominan variables de control. Las variables de control le permiten concluir que los resultados sobre la actividad enzimática obtenidos en su experimento se deben a la variación del pH, la variable independiente. Saber qué factores no cambiar en un experimento es tan importante como saber qué factor variar, de lo contrario, será difícil concluir si los resultados se deben realmente a lo único que probado.
Elija un ácido o una base
El pH de una solución se puede cambiar disolviendo diferentes cantidades de un ácido o una base en agua. Una forma de probar el efecto del pH sobre la actividad enzimática es agregar gradualmente gotas de un ácido fuerte o una base fuerte. en la solución que contiene la enzima, y luego observe el punto en el que la actividad de la enzima se ralentiza o se detiene. Un ácido se define como un compuesto que dona un ion hidrógeno, llamado protón (H +), y una base se define como un compuesto que dona un ion hidróxido (-OH). Los diferentes ácidos y bases tienen diferentes cantidades de protones o iones hidróxido para regalar. No todos los protones o iones de hidróxido se donan inmediatamente cuando se agrega un ácido o una base a una solución, pero la cantidad de protones o iones de hidróxido donados cambia el pH a diferentes velocidades. Por lo tanto, es una buena idea variar el pH en un experimento enzimático usando solo un tipo de ácido o un tipo de base. De lo contrario, se añaden involuntariamente otras variables.
Los tejidos también cambian el pH
Algunos experimentos de laboratorio que estudian la actividad enzimática implican triturar tejido fresco para liberar las enzimas de las células y luego agregar sustrato para medir la actividad enzimática. El tejido fresco contiene sangre. Debido a la presencia de enzimas en la sangre que transforman el gas de dióxido de carbono que se disuelve en la sangre en ácido carbónico, el tejido en sí puede afectar el pH. Por lo tanto, en experimentos que involucran actividad enzimática en tejido fresco, es útil lavar la sangre en un vaso de precipitados con agua fría antes de triturar el tejido. Esto minimizará el cambio involuntario de pH debido al tejido, de modo que se pueda estudiar el cambio intencional de pH.
Mantenga los tamaños iguales
Como se discutió anteriormente, la concentración de enzima es un factor de control que no debe variarse cuando se prueba el efecto del pH sobre la actividad de la enzima. Sin embargo, los procedimientos experimentales aún varían de manera inherente la concentración de enzima de manera sutil. Si se usa una solución pura de enzimas, entonces se mantiene constante la concentración de enzimas. Sin embargo, en experimentos en los que la enzima proviene de tejido fresco, como trozos de papa, trozos de plantas o trozos de hígado, el tamaño de los trozos cambia la cantidad de enzima en cada tubo de ensayo. Por lo tanto, será útil cortar los trozos de tejido lo más uniformemente posible. Este es otro ejemplo de cómo saber qué no cambiar y por qué es difícil no evitar el cambio por completo, ayuda a interpretar los resultados de variar un factor como el pH.