Trace un gráfico de concentración de producto en función del tiempo para los datos del primer tubo de ensayo del ensayo enzimático. Nota: el eje horizontal debe ser "tiempo" y el eje vertical debe ser "concentración de producto".
Calcule la línea de regresión lineal para los puntos de datos que trazó en la Sección 1, Paso 1. Si bien Excel y las calculadoras gráficas pueden determinar fácilmente este modelo lineal, puede obtener una estimación de la regresión pendiente de la línea dividiendo la diferencia en la concentración de producto entre puntos de datos adyacentes por su diferencia en el tiempo.
Registre la pendiente de la línea de regresión lineal de la Sección 1, Paso 2 como "velocidad de reacción inicial (Vo)". Nota: en el modelo de línea de regresión "[concentración de producto] = m [tiempo] + b", el coeficiente "m" es el Pendiente.
Repita los pasos 1, 2 y 3 para el resto de los tubos de ensayo del ensayo.
Grafique el inverso de la concentración de sustrato para cada tubo de ensayo frente al inverso de su velocidad de reacción inicial (de la Sección 1, Paso 4). Por ejemplo, si la velocidad inicial de un tubo de ensayo con una concentración inicial de sustrato de 50 micromolar (uM) fue 80 uM / s, las inversas serían 1/50 uM para la concentración de sustrato y 1/80 uM / s para la concentración inicial velocidad. Nota: la concentración de sustrato inversa debe estar en el eje horizontal y la velocidad inicial inversa debe estar en el eje vertical.
Nota: la concentración de sustrato debe estar en el eje horizontal y la velocidad de reacción inicial debe estar en el eje vertical.
Determine la línea de regresión lineal para el gráfico que trazó en la Sección 2, Paso 1. Nota: debido a que necesitará conocer la intersección y para la línea de regresión, debe ingresar los puntos desde Sección 2, Paso 1 en Excel o en una calculadora gráfica y use el modelo de regresión incorporado funcionalidad.
Divida 1 por la intersección y de la línea de regresión lineal. Esto le dará el valor de la inversa de Vmax, la velocidad máxima de reacción de la enzima. Nota: si el modelo de regresión lineal toma la forma "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + B", entonces el valor de "b" sería la intersección y. Divida 1 por "b" para calcular la inversa de Vmax.
Divida 1 por el resultado de la Sección 2, Paso 3 para calcular el valor real de Vmax.
Determine la concentración de la enzima en el ensayo original (consulte los datos sin procesar). Nota: la concentración de enzima es la misma para todos los tubos de ensayo; solo las concentraciones de sustrato varían en el ensayo.
Divida la Vmax (de la Sección 2, Paso 4) por la concentración de enzima (de la Sección 2, Paso 5). El resultado es el valor de Kcat.
Un redactor con sede en Chicago, Andy Pasquesi tiene una amplia experiencia escribiendo para automóviles (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), servicios financieros (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), clientes de salud (Abbott) y bienes de consumo (Sony, Motorola, Knoll). Tiene una licenciatura en inglés de la Universidad de Harvard, pero no le importa la coma de Oxford.