Οι επιστήμονες χρησιμοποιούν κυτταρομετρία ροής για να κάνουν διάκριση μεταξύ διαφορετικών τύπων κυττάρων ή μικροσκοπικών οργανισμών. Είναι ένα εργαλείο που χρησιμοποιείται σε πολλές εφαρμογές όπως ιατρική διάγνωση ή ιατροδικαστική παθολογία. Ενώ αυτή η πειραματική τεχνική είναι αρκετά εύκολο να επιτευχθεί, η ανάλυση των πολύπλοκων δεδομένων που παράγονται από το κυτταρόμετρο ροής είναι πιο δύσκολο λόγω των πολλαπλών πειραματικών παραγόντων και / ή του κυτταρομέτρου Παράμετροι. Ως εκ τούτου, είναι συνηθισμένο τα κυτταρομετρικά δεδομένα να οπτικοποιούνται και να αναλύονται χρησιμοποιώντας εξελιγμένα επαγγελματικά προγράμματα όπως το CELLQuest ή το FlowJo. Η εξοικείωση με τεχνικές κυτταρομετρίας ροής, μηχανήματα και λογισμικό είναι απαραίτητη για να κατανοήσουμε τα αποτελέσματα που παράγονται από αυτά πειράματα.
Διευκρινίστε τον στόχο του πειράματος ρωτώντας, "Ποια ήταν η ερώτηση ή υπόθεση που ερευνήθηκε;" Αυτό θα είναι απαιτείται για την προσαρμογή των πρωτογενών αποτελεσμάτων στην κατάλληλη μορφή και ρυθμίσεις για περαιτέρω ανάλυση χρησιμοποιώντας στατιστική κυτταρομετρία λογισμικό. Κάντε οποιεσδήποτε αλλαγές είναι απαραίτητες για να εμφανιστούν τα δεδομένα με τις σχετικές ρυθμίσεις (π.χ. θετικά κελιά, αρνητικές πύλες, ένταση φθορισμού, πληθυσμοί κυττάρων κ.λπ.).
Βρείτε πύλες. Τα κύτταρα μπορούν να ομαδοποιηθούν ή απλά να παρατηρηθούν συγκεντρωμένα σε ένα διάγραμμα πυκνότητας ή διάγραμμα περιγράμματος. Οι ομάδες διαχωρίζονται συχνά ανάλογα με την ταυτότητά τους. Εάν μια ομάδα λεκιάζει έντονα για έναν συγκεκριμένο δείκτη ή αντίσωμα, συμπεραίνεται ότι όλα τα μέλη αυτής της ομάδας έχουν την ταυτότητα του συγκεκριμένου τύπου κυττάρου, που εκφράζει αυτόν τον δείκτη. Είναι σύνηθες να εντοπίζουμε κελιά που είναι θετικά για περισσότερους από έναν από αυτούς τους δείκτες και αυτά τα κελιά είναι συνήθως ένα ενδιάμεσο και χαρακτηρίζονται ως «διπλά θετικά».
Κοιτάξτε τα scattergraphs. Ο τρόπος με τον οποίο οι ομάδες κυττάρων εξαπλώνονται σε διάγραμμα διασποράς είναι ένδειξη του μεγέθους των κυττάρων. Τα κελιά με πολύ μεγάλα ή υψηλά διασκορπιστικά είναι συνήθως μεγάλα κελιά. Ωστόσο, μπορεί να είναι μεγάλα απλώς και μόνο επειδή περιέχουν υψηλό ποσοστό κυτταροπλάσματος ή μπορεί να είναι υψηλά επειδή έχουν πολύ μεγάλο πυρήνα. Ανάλογα με τη βιολογία που διερευνάται, αυτό φυσικά θα ποικίλλει σημαντικά μεταξύ των πειραμάτων.
Κοιτάξτε τους αριθμούς. Ρυθμίστε τις γραφικές παραστάσεις για να εμφανίσετε διαφορετικές παραμέτρους σε έναν άξονα (συνήθως τον άξονα Χ) διατηρώντας παράλληλα τις μετρήσεις στον άξονα Υ. Αυτό δείχνει το ποσοστό του δείγματος πληθυσμού που είναι θετικό για τη συγκεκριμένη παράμετρο, ως α Η κορυφή θα παρατηρηθεί κανονικά σε ένα δείγμα με θετική χρώση, το οποίο θα απουσιάζει από τον αρνητικό μάρτυρα δείγμα.
Κοιτάξτε ιστογράμματα πολλαπλών παραμέτρων. Ρυθμίζοντας τον άξονα Χ και τον άξονα Υ σε καθένα αντιπροσωπεύει μια διαφορετική παράμετρο που ήταν διερευνήθηκε κατά τη διάρκεια του πειράματος, είναι δυνατόν να κατανοήσουμε βαθύτερα τις ιδιότητες του δείγματος. Για παράδειγμα, ορίζοντας τον άξονα Χ σε κόκκινο φθορισμό και τον άξονα Υ σε πράσινο φθορισμό, οι πύλες τύπου τεταρτημόριο μπορούν να υπολογιστούν για δείγμα για να δείξει τέσσερις περιοχές ενός τεταρτημορίου στο οποίο υπάρχουν κύτταρα και χρωματίζονται είτε για κόκκινο ή πράσινο φθορισμό, και τα δύο χρώματα, ή κανένα σε όλα. Αυτό επιτρέπει σε ένα ετερογενές δείγμα να χωριστεί στα συστατικά του μέρη και οποιεσδήποτε αλληλεπικαλυπτόμενες οντότητες να οπτικοποιηθούν καθώς και να ποσοτικοποιηθούν.
βιβλιογραφικές αναφορές
- «Ανάλυση δεδομένων κυτταρομετρίας ροής» · Susan Sharrow; 1991
- «Κυτταρομετρία ροής: οργάνωση και ανάλυση δεδομένων» · Marvin Van Dila; 1985
- "Πρωτόκολλα κυτταρομετρίας ροής"; Τερέζα και Ρόμπερτ Χόουλι; 2004
Σχετικά με τον Συγγραφέα
Ο Palmer Owyoung είναι κάτοχος Master of Arts σε διεθνείς επιχειρήσεις από το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Σαν Ντιέγκο και α Πτυχίο Κοινωνιολογίας από το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στη Σάντα Μπάρμπαρα και είναι εκπαιδευμένο μοριακό βιολόγος. Είναι ανεξάρτητος συγγραφέας από το 2006. Εκτός από τη γραφή, είναι έμπορος Forex και έμπορος Διαδικτύου πλήρους απασχόλησης.
Φωτογραφικές μονάδες
Polka Dot RF / Polka Dot / Getty Images