Μόλις εκτελέσετε δείγματα DNA σε πήκτωμα αγαρόζης και τραβήξετε μια φωτογραφία, μπορείτε να αποθηκεύσετε την εικόνα για αργότερα, σε ποιο σημείο μπορείτε να αναλύσετε τα αποτελέσματα και να τα ερμηνεύσετε. Τα είδη των πραγμάτων που αναζητάτε θα εξαρτηθούν από τη φύση του πειράματός σας. Αν κάνετε δακτυλικό αποτύπωμα DNA, για παράδειγμα, θα θελήσετε να συγκρίνετε το μέγεθος τεμαχίων DNA από δύο δείγματα - ίσως από τον ύποπτο και από δείγμα σκηνής εγκλήματος. Αν εργάζεστε με πλασμίδια από βακτήρια, αντίθετα, ίσως χρειαστεί να βεβαιωθείτε ότι το πλασμίδιο περιέχει το ένθετο. Κατά συνέπεια, ο τρόπος ερμηνείας της γέλης σας εξαρτάται εν μέρει από το πείραμα που κάνατε. Ωστόσο, υπάρχουν ορισμένοι γενικοί κανόνες που μπορείτε να εφαρμόσετε.
Σημειώστε ότι μπορεί να χρειαστεί ή όχι να χρησιμοποιήσετε τις οδηγίες σε αυτήν την ενότητα. Η ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης χρησιμοποιείται συχνά για να επιβεβαιώσει ότι ένα πλασμίδιο περιέχει ένα δεδομένο ένθετο. Εάν δεν εργάζεστε με πλασμίδια, μπορείτε να παραλείψετε αυτήν την ενότητα. Εάν, ωστόσο, μπορείτε να ακολουθήσετε αυτές τις οδηγίες.
Παρατηρήστε ότι εάν εργάζεστε με άκοπα ή ψευδώς πλασμίδια, δεν μπορείτε να εκτιμήσετε το μέγεθος χρησιμοποιώντας τη διαδικασία από την ενότητα 1 παραπάνω. Αυτό συμβαίνει επειδή τα άκοπα και τα ψευδοπλασματικά μεταναστεύουν με διαφορετικούς ρυθμούς από το γραμμικό DNA.
Συγκρίνετε τον αριθμό των ζωνών σε κάθε λωρίδα. Θυμηθείτε ότι ένα ένζυμο περιορισμού κόβει το DNA σε θέσεις όπου εμφανίζεται μια δεδομένη αλληλουχία που ονομάζεται θέση περιορισμού. Εάν ένα δείγμα υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ΔΥΟ περιοριστικά ένζυμα, θα πρέπει να υπάρχει και μια ζώνη για το ένθετο και μια ταινία για το υπόλοιπο του πλασμιδίου. Αυτό συμβαίνει επειδή το ένθετο θα πλαισιώνεται από δύο θέσεις περιορισμού, καθεμία από αυτές για ένα διαφορετικό ένζυμο, οπότε περικοπές και στις δύο αυτές θέσεις θα απελευθερώσουν το ένθετο από το πλασμίδιο. Αντίθετα, μια τομή σε μία μόνο θέση θα μετατρέψει το πλασμίδιο σε γραμμικό DNA. Ένα δείγμα που κόβεται χωρίς ένζυμα περιορισμού ή ένα ένζυμο περιορισμού, τότε, θα πρέπει να διαθέτει μία μόνο ζώνη, ενώ ένα δείγμα που κόβεται με δύο ένζυμα περιορισμού θα πρέπει να έχει δύο ζώνες.
Προσέξτε μπάντες που δημιουργήθηκαν από πλασμιδικό DNA. Ένα πλασμίδιο με ψευδώνυμο έχει μια τομή σε έναν μόνο κλώνο, έτσι μετακινείται πιο αργά από ένα κομμένο πλασμίδιο. Τα κομμένα πλασμίδια με τη σειρά τους μεταναστεύουν πιο αργά από το μη κομμένο DNA.
Εκτιμήστε το μέγεθος του ένθετου χρησιμοποιώντας τη διαδικασία που περιγράφεται στην Ενότητα 1 και προσδιορίστε αν ταιριάζει στις προσδοκίες σας (το οποίο θα ποικίλλει ανάλογα με το πείραμα.)
Πράγματα που θα χρειαστείτε
- Μολύβι
- Χαρτί
- Πρόγραμμα υπολογιστικών φύλλων
- Εικόνα της γέλης σας
- Κυβερνήτης