Ο υπολογισμός του τίτλου για έναν ιό είναι ένας περίπλοκος τρόπος να πούμε ότι ένας επιστήμονας μετρά τον αριθμό των ιών σε ένα συγκεκριμένο δείγμα. Για τον υπολογισμό των τίτλων ιών, οι επιστήμονες μολύνουν πλάκες αναπτυσσόμενων βακτηρίων με ιικά διαλύματα σε διάφορες συγκεντρώσεις και υπολογίστε τον αριθμό των ιών στην αρχική λύση μετρώντας τα βακτήρια που έχουν πεθάνει λόγω του ιού μόλυνση.
Φορέστε γάντια, γεμίστε 10 σωληνάρια καλλιέργειας με 9 ml ζωμού και επισημάνετε τα "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" και ούτω καθεξής έως το "10 ^ -10". Αυτοί οι σωλήνες θα χρησιμοποιηθούν για ιογενείς σειριακές αραιώσεις που χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό του φάγου τίτλος. Δεδομένου ότι οι ιοί μπορούν να αυξηθούν σε εξαιρετικά υψηλές συγκεντρώσεις, πρέπει να τους αραιώσετε για να τους μετρήσετε αποτελεσματικά. Κάθε σωλήνας αντιπροσωπεύει μια δεκαπλάσια αραίωση του ιού.
Πάρτε 1 ml της μικτής καλλιέργειας από το σωλήνα σας με την ένδειξη "10 ^ -1" και μεταφέρετέ το με μια νέα πιπέτα στον επόμενο σωλήνα, με την ένδειξη "10 ^ -2". Ανακατέψτε επίσης αυτόν τον σωλήνα.
Συνεχίστε αυτό το μοτίβο για να δημιουργήσετε μια σειρά σειριακής αραίωσης. Θα καταλήξετε με 9 σωληνάρια των 9 ml και 1 σωληνάριο των 10 ml. Τα ιικά φορτία στους σωλήνες σας θα αραιωθούν οπουδήποτε από 10 φορές (ο πρώτος σας σωλήνας) ή 100 φορές (ο δεύτερος σωλήνας σας) έως δέκα δισεκατομμύρια φορές (ο τελικός σας σωλήνας).
Προσθέστε δύο σταγόνες βακτηριακής καλλιέργειας στο άγαρ σας και ανακατέψτε απαλά. Αυτά είναι τα βακτήρια που θα σκοτωθούν, επιτρέποντάς σας να μετρήσετε τον αριθμό των σωματιδίων του ιού σε μια συγκεκριμένη λύση.
Προσθέστε 1 ml κάθε σειριακής αραίωσης στον αντίστοιχο σωλήνα άγαρ ενώ οι σωλήνες βρίσκονται ακόμα στο λουτρό ζεστού νερού. Για παράδειγμα, 1 ml της σειριακής αραίωσης 10 ^ -1 πρέπει να εισέλθει στον σωλήνα άγαρ με την ένδειξη "10 ^ -1".
Ανακατέψτε κάθε σωληνάριο και στη συνέχεια ρίξτε κάθε σωλήνα στην πλάκα Petri με την αντίστοιχη ετικέτα. Αυτό θα δημιουργήσει ένα λεπτό στρώμα άγαρ που έχει εμβολιαστεί με βακτήρια και ιούς σε κάθε πλάκα. Αφήστε τις πλάκες να αναπτυχθούν όλη τη νύχτα σε έναν επωαστήρα.
Βγάλτε τις πλάκες σας από τον επωαστήρα και εξετάστε τις. Θα πρέπει να δείτε θολές περιοχές σε όλη την πλάκα όπου έχουν αναπτυχθεί βακτήρια, εκτός από μικρά διαυγή σημεία που ονομάζονται πλάκες. Αυτές οι πλάκες είναι μπαλώματα νεκρών βακτηρίων και κάθε πλάκα αντιπροσωπεύει έναν ιό.
Πάρτε τον αριθμό των πλακών στο πιάτο σας και πολλαπλασιάστε επί 10. Εάν μετρήσατε 157 πλάκες, θα λάβετε 1570.
Πολλαπλασιάστε τον αριθμό που λάβατε στο προηγούμενο βήμα με το αντίστροφο του αριθμού στο σωλήνα αραίωσης. Για παράδειγμα, εάν η πλάκα που επιλέξατε ήταν η πλάκα 10 ^ -5, θα πολλαπλασιάσατε το 1570 επί 10 ^ 5 για να πάρετε το 157000000. Αυτός ο τελικός αριθμός είναι ο τίτλος του φάγου σας και αντιπροσωπεύει τον αριθμό των ιών ανά ml της αρχικής σας καλλιέργειας.