Η κλωνοποίηση ΤΑ είναι μια απλή και βολική μέθοδος προϊόντων αλυσιδωτής αντίδρασης υποκλωνοποίησης πολυμεράσης (PCR). Το "TA" είναι συντομότερο για "θυμίνη" και "αδενίνη". Αυτή η τεχνική κλωνοποίησης χρησιμοποιεί την ικανότητα της θυμίνης να υβριδοποιείται με την αδενίνη παρουσία λιγκασών. Τα ένζυμα περιορισμού δεν χρησιμοποιούνται, σε αντίθεση με την παραδοσιακή μέθοδο υποκλωνοποίησης. Αντ 'αυτού, τα προϊόντα PCR ενισχύονται χρησιμοποιώντας ένζυμα Taq πολυμεράσης.
Μέθοδος
Η μέθοδος κλωνοποίησης ΤΑ χρησιμοποιεί την τελική δραστικότητα τρανσφεράσης ορισμένων δεοξυριβονουκλεϊκών οξέων προεξοχής σε κάθε άκρο του προϊόντος PCR.
Ένας γραμμικοποιημένος φορέας κλωνοποίησης με μονές, τρεις προεξοχές prime-T (3'-T) που ονομάζεται φορέας Τ χρησιμοποιείται για να κλωνοποιηθεί αυτό το προϊόν PCR σε φορέα πλασμιδίου. Το προϊόν PCR αναμιγνύεται με αυτόν τον φορέα σε υψηλή αναλογία.
Προστίθεται λιγάση DNA (λιγάση Τ4) στο μείγμα, το οποίο επιτρέπει στα δύο προϊόντα να υβριδοποιηθούν και να ενώσουν.
Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα
Η κλωνοποίηση ΤΑ είναι μια βολική μέθοδος υποκλωνοποίησης προϊόντων PCR στον γραμμικό φορέα και είναι πολύ απλούστερη και ταχύτερη από τις παραδοσιακές μεθόδους υποκλωνοποίησης. Επειδή αυτή η μέθοδος δεν χρησιμοποιεί ένζυμα περιορισμού, προϊόντα χωρίς θέσεις ενζύμων περιορισμού μπορούν να κλωνοποιηθούν.
Ένα μειονέκτημα είναι ότι τα κιτ κλωνοποίησης TA είναι πολύ ακριβά και, επομένως, η χρήση τους είναι περιορισμένη. Εκτός αυτού, δεν υπάρχει κατευθυντική κλωνοποίηση. έτσι η πιθανότητα κλωνοποίησης σε αντίθετη κατεύθυνση είναι μεγαλύτερη.
Τα κιτ κλωνοποίησης TA
Αρκετοί κατασκευαστές πωλούν κιτ κλωνοποίησης TA. Ορισμένα είναι τα Invitrogen, QIAGEN και Premier Biosoft.