Hovedårsagen til, at du pletter en prøve, før du lægger den under mikroskopet, er at få et bedre kig på det, men farvning gør meget mere end blot at fremhæve omridset af celler. Nogle pletter kan trænge igennem cellevægge og fremhæve cellekomponenter, og dette kan hjælpe forskere med at visualisere metaboliske processer. Pletter hjælper også med at skelne mellem levende celler og døde. Desuden tillader farvning forskere at tælle antallet af celler af en bestemt type inden for en bestemt biomasse. Tyve eller flere forskellige typer pletter findes, og hver har sit formål.
TL; DR (for lang; Har ikke læst)
Hovedformålet med farvning er at fremhæve celler og dele af celler. Der findes over 20 forskellige typer pletter, og den type plet, du bruger, afhænger af hvad du leder efter.
Typer af pletter
Valget af plet afhænger af, hvad du leder efter. Ikke alle pletter er egnede til levende celler, men dem, der er, inkluderer Bismarck-brun, toluenrød, Nilblå og Nilrød og visse fluorescerende stoffer, der bruges til at fremhæve DNA. Nogle pletter fremhæver sporer, nogle opdager lipider og proteiner, og nogle skifter farve i nærvær af stivelse. Formålet med undersøgelsen bestemmer den bedste type plet, der skal bruges. For eksempel vil en læge, der udfører en PAP-udstrygning, bruge Eosin Y. Det er et surt fluorescerende farvestof, der bliver rødt, når det kommer i kontakt med røde blodlegemer, cytoplasma og cellemembraner. Det bruges også til at teste blodmarg.
I nogle tilfælde kan en efterforsker bruge mere end en plet. For eksempel er hæmatoxylin en plet, der gør cellekerner blå. Når det bruges i forbindelse med eosin, som gør de andre dele af cellen rød eller lyserød, giver det en stærkere kontrast og gør kernerne lettere at differentiere. PAP-udtværinger og blodmargsprøver er lettere at undersøge, når disse to pletter bruges sammen.
Grams plet: Hospitalspersonale bruger Grams plet til at identificere skadelige bakterier. Dette er faktisk en række farvestoffer, der har forskellige effekter på forskellige typer bakterier og giver læger et vigtigt diagnostisk værktøj. Grams plet er en tredelt proces. I den første tilføjes Huckers krystalviolet, der pletter alle bakterier i en ensartet violet farve. I det næste trin tilsættes jodplet, hvilket får farven til at klæbe til gram-positive celler, som primært er Staphylococcus og Streptococcus. Pletten vaskes væk og efterlader de Gram-positive celler med en tydelig violet farve; derefter introduceres en tredje plet, Safranine O, for at forbedre kontrasten mellem de gramnegative bakterier og resten af materialet i objektglasset.
Farvningsprocedure
Når du forbereder en prøve på et dias, kan du tørmontere eller vådmontere den, du kan skære den i en tynd sektion eller smøre den. Når du bruger en plet, er den sædvanlige procedure at montere prøven vådt, hvilket betyder at placere en dråbe vand på objektglasset, sætte prøven i vandet og dække det med et dækglas. Derefter påfører du pletten på et hjørne af objektglasset med en dropper og lader den trækkes mod prøven ved kapillær handling. Det hjælper med at lægge et papirhåndklæde på den modsatte side af diaset for at tiltrække vandet. Når pletten har spredt sig over hele objektglasset, er prøven klar til undersøgelse.