TA-kloning er en enkel og bekvem metode til subkloning af polymerasekædereaktion (PCR) -produkter. "TA" er forkortelse for "thymin" og "adenin." Denne kloningsteknik anvender thymins evne til at hybridisere til adenin i nærvær af ligaser. Restriktionsenzymer anvendes ikke i modsætning til den traditionelle subkloningsmetode. I stedet amplificeres PCR-produkter ved anvendelse af Taq-polymeraser-enzymer.
Metode
TA-kloningsmetoden bruger den terminale transferaseaktivitet af visse deoxyribonukleinsyreudhæng til hver ende af PCR-produktet.
En lineariseret kloningsvektor med enkelt, tre prime-T (3'-T) udhæng kaldet en T-vektor anvendes til at klone dette PCR-produkt i en plasmidvektor. PCR-produktet blandes i høj andel med denne vektor.
DNA-ligase (T4-ligase) tilsættes til blandingen, hvilket gør det muligt for de to produkter at hybridisere og sammenføje.
Fordele og ulemper
TA-kloning er en bekvem metode til subkloning af PCR-produkter i den lineariserede vektor, og det er meget enklere og hurtigere end traditionelle subkloningsmetoder. Da denne metode ikke bruger restriktionsenzymer, kan produkter uden restriktionsenzymsteder klones.
En ulempe er, at TA-kloningssæt er meget dyre, og derfor er deres anvendelse begrænset. Derudover er der ingen retningsbestemt kloning; så sandsynligheden for kloning i modsat retning er større.
TA-kloningsæt
Flere producenter sælger TA-kloningssæt. Nogle er Invitrogen, QIAGEN og Premier Biosoft.