Western blot-testen, også kaldet immunoblotting, er en test for et specifikt protein i en proteinblanding. Western blot-testen udføres efter gelelektroforese eller en enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) test, og den bruger antistoffer til at identificere specifikke proteiner.
Natriumdodecylsulfatpolyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE) er en almindelig test, der anvendes til at adskille proteiner til anvendelse i Western blot. Proteinerne adskilles efter vægt og elektriske egenskaber, når de bevæger sig gennem en gelmatrix.
ELISA-testen bruger enzymer eller antistoffer, der er knyttet til en fast overflade til at skabe testoverfladen. En prøve tilsættes derefter til testoverfladen. Antistoffer eller enzymer, der reagerer eller binder sig til proteiner, indikerer et positivt resultat.
Western blot-testen udføres efter gelelektroforese. De adskilte proteiner overføres (eller blottes) til nitrocellulose- eller nylonmembraner og identificeres af specifikke antistoffer, der er mærket af et sekundært protein.
Western blot-testen bruges til at bekræfte positive resultater fra enten gelelektroforese eller ELISA-test. Western blot-testen kan identificere proteiner mere specifikt og kan udelukke falske positive.