Sådan måles bakterievækst i petriskåle

Bakterier dyrkes i petriskåle på et fast medium kendt som bakteriel agar, hvor der dannes hævede, cirkulære kolonier. I modsætning til en individuel bakteriecelle er en koloni en gruppe af bakterier, der er store nok til at være synlige for det blotte øje. Bakterievækst kan måles ved simpel observation af, hvor mange kolonier der er til stede; mere kvantitative metoder indbefatter imidlertid anvendelsen af ​​et tællekammer eller oftere levedygtige tællinger. Sidstnævnte bruges hyppigst, da det også giver kvalitativ information såsom effekten af ​​forskellige vækstbetingelser. Da der kan være milliarder bakterier i en petriskål, måling først kræver fortynding af prøven, så det er muligt at tælle antallet af kolonier.

I et reagensglas tilsættes 10 mikroliter af den startende bakteriekultur til 90 mikroliter fortyndingsmedium. Luk låget på røret tæt og hvirvel forsigtigt for at opnå en homogen blanding. Nu er prøven en tiendedel af sin oprindelige koncentration.

Overfør 10 mikroliter af denne nye prøve til et nyt reagensglas indeholdende 90 mikroliter fortyndingsmedium, bland det igen. Endnu en gang vil resultatet blive prøven yderligere fortyndet - nu vil den være en hundrededel af sin oprindelige koncentration. Gentag dette flere gange, indtil den originale prøve er blevet fortyndet mellem 10

4 og 1010 gange. Sørg for, at hvert rør er mærket med den korrekte fortynding, for eksempel 10-1, 10-2 og så videre.

Doser 10 mikroliter af den sidste fortynding afsluttet på agarpladen. Ved hjælp af spredningskanten fordeles bakterieopløsningen over hele overfladen af ​​agarpladen. Gentag dette for yderligere to plader. Det er også almindeligt at udføre disse trin med andre fortyndingsniveauer til sammenligning. Sørg for at mærke bunden af ​​pladerne. Udskift lågene på hver plade, og lad agarpladerne tørre i flere minutter, enten på en laboratoriebænk under en flamme eller i en inkubator. Placer pladerne i inkubatoren, som skal indstilles til den passende temperatur for bakteriestammen. Lad vokse i 12 til 16 timer.

Kolonier skal være synlige efter 16 timer; dog kan nogle genetiske modifikationer kræve længere tid (for eksempel farveudvikling). Når kolonier kan observeres, skal du tage pladerne ud og finde dem, der har mellem 30 og 300 kolonier. Brug en permanent markør til at placere en prik i bunden af ​​petriskålen - siden med agaren, ikke låget - hvor som helst en koloni er synlig gennem agaren. Tæl hver markør prik. Gentag for hver skål.

For at måle mængden af ​​bakterier i startkulturen til dette eksperiment skal fortyndingen vendes i beregningerne to steder. For det første, når du tog en mikroliter fra reagensglasset for at sætte petriskålen, tog du en tiendedel af den fortyndede prøve, så du skal multiplicere alt med 10 for at vende det. Desuden, hvis fortyndingsfaktoren i reagensglasset f.eks. Var 10-7, så skal antallet af kolonier ganges med 107 for at vende fortyndingseffekten. Fjern blot det negative tegn fra eksponenten i beregningerne. Brug formlen:

[Antal kolonier talt] × 10 × [hvor mange gange prøven skal ganges for at komme til den oprindelige koncentration: for eksempel 105] = Antal kolonidannende enheder (CFU) pr. Milliliter startkultur. Dette er bakterievæksten i dine petriskåle.

  • Del
instagram viewer