Under tyndtlagskromatografi placerer en tekniker pletter af en kemisk blanding på en flad plade overtrukket med et lag absorberende materiale og sætter derefter den nederste del af pladen i opløsningsmiddel. Når opløsningsmidlet bevæger sig op ad pladen, bevæger kemikalier i blandingen sig med det i forskellige hastigheder, så de adskilles. Denne test bestemmer, hvilke kemikalier der er i en blanding ved at sammenligne ukendte rejsesatser med kendte standarder. Resultaterne kan dog påvirkes af mange faktorer.
TL; DR (for lang; Har ikke læst)
Retentionsfaktorværdier i tyndtlagskromatografi påvirkes af absorbenten, opløsningsmidlet, selve kromatografipladen, påføringsteknik og opløsningsmidlets og pladens temperatur.
Fastholdelsesfaktorer
Retentionsfaktoren for et kemikalie under tyndtlagskromatografi er et mål for, hvor langt det bevæger sig op ad pladen som reaktion på opløsningsmidlets bevægelse. Da kemikaliets absolutte bevægelse afhænger af, hvor langt opløsningsmidlet bevæger sig, beregner du retentionsfaktorværdier i forhold til graden af opløsningsmiddelbevægelse. Retentionsfaktoren for et kemikalie er den lodrette afstand, som kemikaliet bevæger sig fra det sted, hvor det var oprindeligt påført pladen divideret med afstanden med opløsningsmidlet målt fra samme start punkt.
Tyndtlagskromatografiplade
Selve tyndtlagskromatografipladen kan påvirke retentionsfaktorværdien opnået for et givet kemikalie. Tyndtlagskromatografiplader kan overtrækkes med en række absorberende faste stoffer; hyppigst silica eller aluminiumoxid. Da retentionsfaktoren er baseret på kemikaliets relative affinitet for absorbenten sammenlignet med opløsningsmidlet, kan ændring af absorbenten i høj grad ændre retentionsfaktoren. Tykkelsen og ensartetheden af laget af absorberende kan også variere fra plade til plade, især hvis de er håndlavede. Disse faktorer kan også ændre retentionsfaktorværdien for kemikalier.
Faktorer til fastholdelse af opløsningsmiddel påvirker
Da opløsningsmidlet fører kemikaliet op på pladen, vil det anvendte opløsningsmiddel også have en væsentlig indvirkning på retentionsfaktorværdien for kemikaliet. Et opløsningsmiddel, der har en stærkere interaktion for et bestemt kemikalie, vil lettere overvinde ethvert affinitet af kemikaliet til det absorberende lag, og flyt det kemiske stof længere i en given periode på tid. Blandinger af opløsningsmidler kan også have forskellige virkninger afhængigt af andelen af hvert opløsningsmiddel.
Andre faktorer
Der er et par andre faktorer, som i nogle tilfælde kan påvirke fastholdelsesfaktoren. Opløsningsmidlets og pladens temperatur kan foretage små ændringer, da opløsningsmidlet for eksempel ofte kan bedre opløse de kemikalier, det transporterer ved højere temperaturer. Teknikernes teknik til påføring af prøven på pladen kan også ændre retentionsfaktoren. Påføring af for meget prøve kan resultere i, at store, diffuse bånd af kemikalier bevæger sig op ad pladen, hvilket gør det vanskeligt at måle nøjagtigt den afstand, kemikaliet er blevet transporteret.