Grundlæggende komponenter i en HPLC

Højtydende væskekromatografi er en teknik til laboratorieanalyse af en blanding. Det er en effektiv type kromatografi, der bruger højt tryk snarere end blot tyngdekraften til at drive en prøve af en blanding gennem en søjle. En prøve injiceres, derefter hjælper en pumpe, der indeholder store mængder tryk, med at flytte prøven langs en pakket søjle, hvor den adskilles i individuelle komponenter. Denne adskillelse analyseres derefter af en detektor for at give resultater.

For at blive injiceret i en HPLC skal en prøve først opløses i et polært flydende opløsningsmiddel, fortrinsvis en med kendte HPLC-spektre, så dens data kan skelnes fra prøven. Den flydende opløsning, der indeholder prøven, placeres i instrumentet og sendes ind i kolonnen. Den aktuelle placering af injektionsstedet afhænger af instrumentets mærke. I de fleste tilfælde er injektionsprocessen automatiseret, men i nogle tilfælde skal en laboratoriearbejder injicere prøven ved hjælp af en lille sprøjtenål.

Pumpekomponenten i HPLC-enheden er nødvendig, fordi den tilvejebringer det tryk, der driver prøven gennem søjlen. Pumpestyrken varierer, men en kraftig kan producere et tryk på op til 6.000 psi eller pund pr. Kvadrat tomme, som påføres, efter at prøven er injiceret. Dette gør det muligt for prøven at passere hurtigere og mere effektivt gennem søjlen, end hvis den drypper igennem med kun tyngdekraften.

Den øgede hastighed for en prøve, der føres gennem søjlen af ​​en pumpe, muliggør anvendelse af en anden søjletype end dem, der anvendes i simpel væskekromatografi. Pakningsmaterialet i søjlen kan have en meget mindre partikelstørrelse, hvilket øger overfladearealet og assisterer derfor interaktioner mellem prøven og søjlen. De fleste HPLC-søjler arbejder gennem polaritet. Prøven opløses i et polært opløsningsmiddel, og søjlen består af stort set ikke-polære carbonhydrider. De polære dele af prøve molekylet passerer meget hurtigt gennem søjlen, fordi de primært interagerer med opløsningsmiddel, hvorimod prøveens ikke-polære komponenter dvæler i søjlen og danner svage interaktioner med søjlen komponenter. Derfor kommer prøveens komponenter ud af søjlen i rækkefølge fra mest polære til mest ikke-polære.

Detektorer varierer også afhængigt af den anvendte type HPLC-instrument. De fleste fungerer dog på samme grundlæggende måde. En kilde til ultraviolet lys skinner på de adskilte prøvekomponenter, når de kommer ud af søjlen. De fleste organiske forbindelser absorberer en vis mængde lys, så når det passerer forbi den påførte lysstråle, kan en detektor afhente, hvor meget lys der absorberes. Detektoren registrerer også komponenternes tilbageholdelsestid baseret på rækkefølgen, i hvilken de kommer ud af kolonnen. Denne output kan derefter analyseres baseret på topareal for at bestemme den nøjagtige karakter af prøveens komponenter.