Plot et diagram over produktkoncentration versus tid for dataene fra det enzymatiske analyses første reagensglas. Bemærk: den vandrette akse skal være "tid", og den lodrette akse skal være "produktkoncentration".
Beregn den lineære regressionslinie for de datapunkter, du planlagde i afsnit 1, trin 1. Mens Excel- og grafregnemaskiner nemt kan bestemme denne lineære model, kan du udlede et skøn over regressionen linjens hældning ved at dividere forskellen i produktkoncentration mellem tilstødende datapunkter med deres tidsforskel.
Registrer hældningen på den lineære regressionslinie fra afsnit 1, trin 2 som "initial reaktionshastighed (Vo)." Bemærk: i regressionslinjemodellen "[produktkoncentration] = m [tid] + b" er koefficienten "m" den hældning.
Gentag trin 1, 2 og 3 for resten af reagensglas i analysen.
Plot det inverse af substratkoncentration for hvert reagensglas versus det inverse af dets oprindelige reaktionshastighed (fra afsnit 1, trin 4). For eksempel, hvis starthastigheden for et reagensglas med en indledende substratkoncentration på 50 mikromolær (uM) var 80 uM / s, inverserne ville være 1/50 uM for substratkoncentrationen og 1/80 uM / s for den indledende hastighed. Bemærk: den inverse substratkoncentration skal være på den vandrette akse, og den inverse starthastighed skal være på den lodrette akse.
Bemærk: substratkoncentration skal være på den vandrette akse, og den indledende reaktionshastighed skal være på den lodrette akse.
Bestem den lineære regressionslinie for det diagram, du har tegnet i afsnit 2, trin 1. Bemærk: fordi du bliver nødt til at kende y-skæringspunktet for regressionslinjen, skal du indtaste punkterne fra Afsnit 2, trin 1 i enten Excel eller en grafregner og brug den indbyggede regressionsmodellering funktionalitet.
Del 1 med y-skæringen fra den lineære regressionslinie. Dette giver dig værdien af det inverse af Vmax, den maksimale reaktionshastighed for enzymet. Bemærk: Hvis den lineære regressionsmodel har formen "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + B", ville værdien af "b" være y-skæringen. Del 1 med "b" for at beregne det inverse af Vmax.
Del 1 med resultatet fra sektion 2, trin 3 for at beregne den faktiske værdi af Vmax.
Bestem enzymets koncentration i det originale assay (se rådata). Bemærk: Enzymkoncentrationen er den samme for alle reagensglas; kun substratkoncentrationerne varierer i analysen.
Del Vmax (fra afsnit 2, trin 4) med enzymkoncentrationen (fra afsnit 2, trin 5). Resultatet er værdien af Kcat.
Andy Pasquesi er en Chicago-baseret tekstforfatter og har lang erfaring med at skrive til bilindustrien (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), finansielle tjenester (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), sundhedspleje (Abbott) og forbrugsvarer (Sony, Motorola, Knoll). Han har en Bachelor of Arts på engelsk fra Harvard University, men er ligeglad med Oxford-kommaet.