Výpočet titru viru je komplikovaný způsob, jak říci, že vědec počítá počet virů v konkrétním vzorku. Pro výpočet titru viru infikují vědci plotny rostoucích bakterií virovými roztoky v různých koncentracích a zjistit počet virů v původním roztoku spočítáním bakterií, které na tento virus zemřely infekce.
Nasaďte si rukavice, naplňte 10 kultivačních zkumavek 9 ml vývaru a označte je „10 ^ -1“, „10 ^ -2“, „10 ^ -3“ a tak do „10 ^ -10.“ Tyto zkumavky budou použity pro sériová ředění virů použitá k výpočtu fága titr. Protože viry mohou růst na neuvěřitelně vysoké koncentrace, musíte je zředit, abyste je mohli efektivně počítat. Každá zkumavka představuje desetinásobné ředění viru.
Vezměte 1 ml smíšené kultury z vaší zkumavky označené „10 ^ -1“ a přeneste ji novou pipetou do další zkumavky označené „10 ^ -2“. Smíchejte také tuto zkumavku.
Pokračujte v tomto vzoru a vytvořte sérii sériových ředění. Nakonec získáte 9 zkumavek o objemu 9 ml a 1 zkumavku o objemu 10 ml. Virová zátěž ve vašich zkumavkách bude zředěna kdekoli od 10krát (vaše první zkumavka) nebo 100krát (vaše druhá zkumavka) až deset miliardkrát (vaše poslední zkumavka).
Přidejte na svůj agar dvě kapky bakteriální kultury a jemně ji promíchejte. Jedná se o bakterie, které budou usmrceny, což vám umožní spočítat počet virových částic v konkrétním roztoku.
Přidejte 1 ml každého sériového ředění do odpovídající agarové zkumavky, zatímco jsou zkumavky stále v horké vodní lázni. Například 1 ml sériového ředění 10 ^ -1 by se mělo dostat do agarové zkumavky označené „10 ^ -1“.
Smíchejte každou zkumavku a poté každou zkumavku nalijte do Petriho destičky s odpovídajícím štítkem. Tím se vytvoří tenká vrstva agaru, která byla naočkována bakteriemi a viry v každé destičce. Nechte destičky růst přes noc v inkubátoru.
Vyjměte misky z inkubátoru a zkontrolujte je. Měli byste vidět zakalené oblasti na celé desce, kde rostly bakterie, s výjimkou malých jasných skvrn nazývaných plaky. Tyto plaky jsou náplasti mrtvých bakterií a každý plak představuje jeden virus.
Vezměte počet destiček na talíř a vynásobte je 10. Pokud byste napočítali 157 plaket, dostali byste 1570.
Vynásobte číslo, které jste dostali v předchozím kroku, inverzí čísla na zřeďovací zkumavce. Například pokud vybraný talíř byl deskou 10 ^ -5, vynásobíte 1570 10 ^ 5 a získáte 157000000. Toto konečné číslo je váš fágový titr a představuje počet virů na ml vaší původní kultury.