Bakterie se pěstují v Petriho miskách na pevném médiu známém jako bakteriální agar, kde se tvoří vyvýšené kruhové kolonie. Na rozdíl od jednotlivé bakteriální buňky je kolonie skupina bakterií dostatečně velká, aby byla viditelná pouhým okem. Růst bakterií lze měřit jednoduchým pozorováním počtu kolonií; kvantitativnější metody však zahrnují použití počítací komory nebo častěji počet životaschopných destiček. Ten se používá nejčastěji, protože poskytuje také kvalitativní informace, jako je účinek různých podmínek růstu. Protože v Petriho misce mohou být miliardy bakterií, měření vyžaduje nejprve naředění vzorku, aby bylo možné spočítat počet kolonií.
Ve zkumavce přidejte 10 mikrolitrů výchozí bakteriální kultury k 90 mikrolitrům ředicího média. Uzavřete pevně víčko zkumavky a jemně vortexujte, abyste získali homogenní směs. Nyní je vzorek desetinou původní koncentrace.
Přeneste 10 mikrolitrů tohoto nového vzorku do nové zkumavky obsahující 90 mikrolitrů ředicího média, znovu jej promíchejte. Výsledkem bude opět vzorek, který se dále ředí - nyní to bude jedna setina původní koncentrace. Opakujte to několikrát, dokud nebude původní vzorek naředěn mezi 10
4 a 1010 krát. Zajistěte, aby každá zkumavka byla označena správným ředěním, například 10-1, 10-2 a tak dále.Na agarovou misku se nanese 10 mikrolitrů posledního zředění dokončeného. Pomocí rozmetací hrany rozdělte bakteriální roztok po celé ploše agarové destičky. Opakujte to pro další dva talíře. Je také běžné provádět tyto kroky s jinými úrovněmi ředění pro srovnání. Nezapomeňte označit spodní část desek. Nasaďte víčka na každou destičku a nechte agarové misky několik minut sušit buď na laboratorní lavici pod plamenem, nebo v inkubátoru. Destičky vložte do inkubátoru, který by měl být nastaven na vhodnou teplotu pro kmen bakterií. Nechejte růst 12 až 16 hodin.
Kolonie by měly být viditelné po 16 hodinách; některé genetické modifikace však mohou vyžadovat delší dobu (například vývoj barev). Když jsou kolonie pozorovatelné, vyjměte talíře a najděte ty, které mají mezi 30 a 300 koloniemi. Pomocí permanentního značkovače položte na dno Petriho misky tečku - stranu s agarem, ne víko - všude, kde je agarem vidět kolonie. Spočítejte každou značku. Opakujte pro každou misku.
Chcete-li měřit množství bakterií ve výchozí kultuře pro tento experiment, je třeba ve výpočtech obrátit ředění, a to na dvou místech. Nejprve, když jste odebrali jeden mikrolitr ze zkumavky k vložení do Petriho misky, odebrali jste jednu desetinu zředěného vzorku, takže musíte vše vynásobit 10, abyste to zvrátili. Kromě toho, pokud byl faktor zředění ve zkumavce například 10-7, pak musí být počet kolonií vynásoben 107 aby se zvrátil účinek ředění. Jednoduše odstraňte záporné znaménko z exponentu ve výpočtech. Použijte vzorec:
[Počet spočítaných kolonií] × 10 × [kolikrát musí být vzorek vynásoben, aby se dosáhlo původní koncentrace: například 105] = Počet jednotek tvořících kolonie (CFU) na mililiter výchozí kultury. Toto je bakteriální růst ve vašich Petriho miskách.