Основната причина да оцветете образец, преди да го поставите под микроскопа, е да го разгледате по-добре, но оцветяването прави много повече от просто подчертаване на очертанията на клетките. Някои петна могат да проникнат в клетъчните стени и да подчертаят клетъчните компоненти и това може да помогне на учените да визуализират метаболитните процеси. Петната също помагат да се прави разлика между живите клетки и мъртвите. Освен това оцветяването позволява на учените да преброят броя на клетките от определен тип в рамките на определена биомаса. Съществуват двадесет или повече различни вида петна и всяко от тях има своето предназначение.
TL; DR (твърде дълго; Не прочетох)
Основната цел на оцветяването е да подчертае клетките и частите от клетките. Съществуват над 20 различни вида петна, а видът петно, който използвате, зависи от това, което търсите.
Видове петна
Изборът на петно зависи какво търсите. Не всички петна са подходящи за живи клетки, но тези, които са, включват бисмарково кафяво, толуеново червено, нилско синьо и нилско червено и някои флуоресценти, използвани за подчертаване на ДНК. Някои петна подчертават спорите, някои откриват липиди и протеини, а някои променят цвета в присъствието на нишестета. Целта на изследването определя най-добрия тип оцветяване за използване. Например, практикуващ лекар, който извършва PAP цитонамазка, ще използва Eosin Y. Това е киселинна флуоресцентна боя, която става червена, когато контактува с червените кръвни клетки, цитоплазмата и клетъчните мембрани. Използва се и за изследване на кръвен мозък.
В някои случаи следователят може да използва повече от едно петно. Например хематоксилинът е петно, което превръща клетъчните ядра в синьо. Когато се използва заедно с еозин, който превръща останалите части на клетката в червено или розово, той осигурява по-силен контраст и прави ядрата по-лесни за диференциране. ПАП мазките и пробите от кръвен мозък са по-лесни за изследване, когато тези две петна се използват заедно.
Петно на Грам: Болничните служители използват петното на Грам, за да идентифицират вредните бактерии. Това всъщност е поредица от оцветители, които имат различно въздействие върху различните видове бактерии и дават на лекарите важно диагностично средство. Петното на Грам е процес от три части. В първата е добавена кристалната виолетка на Хъкър, която оцветява всички бактерии в еднороден виолетов цвят. На следващия етап се добавя йодно петно, което кара цветът да се придържа към Грам-положителни клетки, които са предимно Staphylococcus и Streptococcus. Петното се отмива, оставяйки Грам-положителните клетки с отчетлив виолетов цвят; след това се въвежда трето петно, Safranine O, за да се засили контрастът между Грам-отрицателните бактерии и останалата част от материала в предметното стъкло.
Процедура на оцветяване
Когато подготвяте образец върху предметно стъкло, можете да го монтирате на сухо или мокро, можете да го нарежете на тънък участък или да го намажете. Когато се използва петно, обичайната процедура е мокрото монтиране на образеца, което означава да се постави капка вода върху пързалката, да се постави образецът във водата и да се покрие с капак. След това нанасяте петното върху ъгъл на предметното стъкло с капкомер и му позволявате да бъде изтеглено към образеца чрез капилярно действие. Помага да поставите хартиена кърпа на противоположната страна на пързалката, за да привлечете водата. След като петното се разпространи по цялото стъкло, образецът е готов за изследване.
