Течният хранителен бульон се използва за култивиране на бактерии като Escherichia coli. Рецептите за този бульон варират в зависимост от бактериалните видове и наличието на генетични модификации, например антибиотична резистентност. Бульонът може да се втвърди чрез добавяне на агар, който позволява на бактериите да образуват отделни колонии, докато в течна култура те просто се разпръскват по целия обем. Това е основна, но съществена техника за усъвършенствани методи като клониране на гени или микробиологични анализи. Тази статия предполага, че стандартните лабораторни щамове Escherichia coli трябва да се култивират върху плочи от агар (или чашки на Петри) от бульон Luria (LB).
Претеглете 10 грама триптон с бактериален клас, 5 грама екстракт от мая, 5 грама натриев хлорид, 15 грама агар или агароза и 1 милилитър 1 N натриев хидроксид. Смесете ги с обем дестилирана и автоклавирана стерилна вода, докато се получи 1 литър среда. Автоклавирайте медията в свободно затворени бутилки или колби за 25 минути. Оставете да се охлади до приблизително 50 градуса по Целзий, преди да добавите реагенти, които ще бъдат унищожени при висока температура, като антибиотици или други хранителни добавки.
Оставете автоклавираната среда да се охлади до 50 градуса по Целзий и не по-ниска от 45 градуса по Целзий, тъй като агарът ще се стегне в контейнера си, преди да може да се излее. Вземете стерилни чашки на Петри и налейте достатъчно, за да покриете цялата повърхност на плочата и поне половината от нейната дълбочина. Избягвайте препълването на чиниите и за предпочитане не позволявайте на агара да контактува с горния ръб на съда. Оставете плочите да се втвърдят в стерилна среда (например под качулка с ламинарен поток), като оставите капаците отстранени и до ъгъла на аспиратора.
Изсушете чиниите. Въпреки че плочите могат да се използват веднага след като бъдат поставени, на повърхността на агара ще има малко влага, което ще попречи на бактериалните колонии да се прилепят достатъчно. Поради това е най-добре да изсушите плочите, преди да нанесете каквито и да е бактерии, например като ги оставите да седят стайна температура за няколко дни или за половин час под ламинарен абсорбатор или при 37 градуса по Целзий инкубатор.
Съхранявайте чиниите. Изсушените чинии трябва да се сложат с главата надолу (обърнати) върху капака им и да се върнат в оригинала опаковка, залепена с тиксо и увита във фолио, за да се предпази от светлина или в подходяща контейнер. Винаги напишете датата на приготвяне върху плочите и избягвайте да използвате, ако плочите са на повече от 2 месеца.
Препратки
- „Съвременни протоколи в молекулярната биология“; Карън Елбинг и Роджър Брент; 2002
Съвети
- Извършете възможно най-много от горните стъпки (за предпочитане всички) в стерилна среда (например под открит пламък или качулка с ламинарен поток), за да се предотврати навлизането и нарастването във въздуха на бактериални замърсители в медии.
за автора
Палмър Оуюнг е магистър по международен бизнес от Калифорнийския университет в Сан Диего и Бакалавър по социология от Калифорнийския университет в Санта Барбара и е обучен молекуляр биолог. От 2006 г. е писател на свободна практика. В допълнение към писането, той е редовен търговец на Forex и интернет маркетинг.
Снимки Кредити
Юпитеримаж / Комсток / Гети изображения