Какво е TA Cloning?

ТА клонирането е прост и удобен метод за субклониране на продукти с полимеразна верижна реакция (PCR). „TA“ е съкращение от „тимин“ и „аденин“. Тази техника на клониране използва способността на тимина да хибридизира до аденин в присъствието на лигази. Рестрикционните ензими не се използват, за разлика от традиционния метод на субклониране. Вместо това, PCR продуктите се усилват с помощта на Taq полимеразни ензими.

Метод

Методът за клониране на ТА използва крайната трансферазна активност на някои дезоксирибонуклеинови киселини надвисващи към всеки край на PCR продукта.

За клониране на този PCR продукт в плазмиден вектор се използва линеаризиран вектор за клониране с единични, три прости Т-(3'-Т) надвеси, наречен Т-вектор. PCR продуктът се смесва с този вектор във висока пропорция.

ДНК лигаза (Т4 лигаза) се добавя към сместа, което позволява на двата продукта да хибридизират и да се присъединят.

Предимства и недостатъци

ТА клонирането е удобен метод за субклониране на PCR продукти в линеаризирания вектор и е много по-прост и бърз от традиционните методи за субклониране. Тъй като този метод не използва рестрикционни ензими, продукти без сайтове на рестрикционни ензими могат да бъдат клонирани.

instagram story viewer

Недостатък е, че комплектите за клониране на TA са много скъпи и следователно използването им е ограничено. Освен това няма насочено клониране; така че вероятността за клониране в обратна посока е по-голяма.

Комплекти за клониране TA

Няколко производители продават комплекти за клониране TA. Някои са Invitrogen, QIAGEN и Premier Biosoft.

Teachs.ru
  • Дял
instagram viewer