Един от класическите начини за определяне на концентрацията на микроби в проба е разреждането на пробата, отглеждането на микробите върху плочи и преброяването на колониите. Покритите микроби растат от образуваща колония единица, състояща се от една или повече клетки, във видима колония, която може да се види и преброи. Бактериите са най-често срещаният микроб за оценка с помощта на броя на плочките. Броят на колониите се използва за откриване и преброяване на микроби в почвата, водата и храната. Протоколите за преброяване на колонии подчертават точния и методичен подход.
Разреждане на проби, покритие и инкубация
Ако просто намажете проба от микроб върху плоча с агар, ще видите толкова много образуващи колонии единици, че отделните колонии ще се смесят, което ги прави невъзможно да се преброят. За да разрешите този проблем, смесете пробата в течна среда, вземете малко количество от тази смес и допълнително я разредете. Повторете този процес шест до 10 пъти. Разпределете крайното разреждане върху плоча с агар и го инкубирайте в продължение на четири до седем дни, преди да преброите колониите.
Ръчно броене
Основният трик при броене на колонии е да се брои всяка точка на колонията веднъж. Един от подходите е да поставите чашата на Петри на решетъчен фон и да преброите колониите във всяка решетъчна клетка, като се движите по методичен начин през всички клетки. Отбелязването на преброените колонии на гърба на чашата на Петри също може да бъде полезен подход. Като цяло ще трябва да броите поне три чинии; използвайте само плочи, съдържащи 30 до 300 колонии, за да правите солидни заключения, предлага Microbiology Network, фирма, която предоставя консултантски услуги на лаборатории и производители. Плаките с колонии, които са твърде многобройни, за да бъдат преброени или с твърде малко колонии, трябва да бъдат повторно покрити от ново разреждане.
Автоматизирано броене
Човешката грешка добавя към времето, включено в преброяването на колониите ръчно. За да подобрите както точността, така и ефективността, поставете чашата на Петри в автоматизирано устройство за броене на колонии. Автоматизираните броячи на колонии правят изображение на ястието, отделят колониите от фона и след това използват алгоритъм за преброяване на колониите в чинията. Алгоритмите могат да имат трудности при разграничаването на колонии, когато две или повече колонии се допират по краищата, така че това е област на текущо разработване на софтуер.
Улесняване на преброяването
Точността на изчисляване на плътността на микробите от броя на колониите има някои ограничения. Единиците, образуващи колонии, могат да бъдат единична клетка, верига от клетки или цяла група клетки. Предполага се, че колонията представлява една клетка, така че концентрациите, изчислени от броя на колониите, могат да бъдат ниски. Различните микроби се нуждаят от различни условия на растеж и колониите на плочата представляват само онези микроби, които процъфтяват върху тази среда за растеж при тези условия на инкубация. В допълнение, преброяването на колонии не регистрира мъртви клетки, което е важно, когато имате нужда от концентрацията на клетките в оригиналната проба.