Как да измерим растежа на бактериите в ястията на Петри

Бактериите се отглеждат в чаши на Петри върху твърда среда, известна като бактериален агар, където се образуват издигнати кръгови колонии. За разлика от отделна бактериална клетка, колонията е група бактерии, достатъчно голяма, за да бъде видима с просто око. Растежът на бактериите може да бъде измерен чрез просто наблюдение на това колко колонии присъстват; обаче, по-количествените методи включват използването на преброителна камера или по-често жизнеспособни преброявания на плочи. Последният се използва най-често, тъй като предоставя и качествена информация, като например ефекта от променливите условия на растеж. Тъй като в чашка на Петри може да има милиарди бактерии, първо измерването изисква разреждане на пробата, така че да е възможно да се преброи броят на колониите.

В епруветка добавете 10 микролитра от изходната бактериална култура към 90 микролитра среда за разреждане. Затворете плътно капака на епруветката и внимателно завихрете, за да получите хомогенна смес. Сега пробата е една десета от първоначалната концентрация.

Прехвърлете 10 микролитра от тази нова проба в нова епруветка, съдържаща 90 микролитра среда за разреждане, разбъркайте отново. За пореден път резултатът ще бъде допълнително разредената проба - сега тя ще бъде една стотна от първоначалната концентрация. Повторете това няколко пъти, докато първоначалната проба не бъде разредена между 104 и 1010 пъти. Уверете се, че всяка епруветка е етикетирана с правилното разреждане, например 10-1, 10-2 и така нататък.

Дозирайте 10 микролитра от последното разреждане, завършено върху агаровата плоча. Използвайки разстилащия ръб, разпределете бактериалния разтвор по цялата повърхност на агаровата плоча. Повторете това за още две чинии. Също така е обичайно тези стъпки да се извършват с други нива на разреждане за сравнение. Не забравяйте да маркирате дъното на плочите. Сменете капаците на всяка плоча и оставете плочите с агар да изсъхнат за няколко минути или на лабораторна пейка под пламък, или в кувьоз. Поставете плочите в инкубатора, който трябва да бъде настроен на подходяща температура за щама на бактериите. Оставете да расте 12 до 16 часа.

Колониите трябва да бъдат видими след 16 часа; някои генетични модификации обаче може да изискват по-дълго (например развитие на цвета). Когато се наблюдават колонии, извадете плочите и намерете такива, които имат между 30 и 300 колонии. С помощта на постоянен маркер поставете точка на дъното на чашата на Петри - отстрани с агара, а не капака - навсякъде, където през агара се вижда колония. Пребройте всяка маркерна точка. Повторете за всяко ястие.

За да се измери количеството бактерии в изходната култура за този експеримент, разреждането трябва да се обърне при изчисленията на две места. Първо, когато взехте един микролитър от епруветката, за да поставите в чашата на Петри, взехте една десета от разредената проба, така че трябва да умножите всичко по 10, за да обърнете това. Освен това, ако коефициентът на разреждане в епруветката е например 10-7, тогава броят на колониите трябва да се умножи по 107 с цел да се обърне ефекта на разреждане. Просто премахнете отрицателния знак от степента в изчисленията. Използвайте формулата:

[Брой преброени колонии] × 10 × [колко пъти трябва да се умножи пробата, за да се достигне първоначалната концентрация: например 105] = Брой единици, образуващи колонии (CFU) на милилитър изходна култура. Това е бактериалният растеж във вашите чашки на Петри.

  • Дял
instagram viewer