Високоефективната течна хроматография (HPLC) е лабораторна техника, използвана за разделяне и идентифициране на съединения. Това е вид колонна хроматография, която разчита на различни полярности на съединенията в разтвор, за да ги отдели. HPLC се различава от стандартната колонна хроматография, тъй като използва натиск, за да прокара разтвора по-бързо през колоната и следователно дава по-бързи, а понякога и по-точни резултати. Целта е да се отделят съединенията в колоната и те да излязат отделно.
Поради скоростта на HPLC и разчитането на различни полярности на съединенията, две съединения с подобна структура и полярности могат да излязат от хроматографския апарат едновременно или почти еднакво време. Това е известно като коефициент. Коелуирането затруднява точно определянето коя част от сместа се елуира в кой момент.
HPLC обикновено използва стъклена колона, пълна с мъниста, направени от различни материали. Смесите, които се изтласкват през колоната, имат химикали, които се свързват с различна сила на зърната. Силата на свързването, която зависи от сходството в полярността, определя колко дълго химикалът ще се свърже с топчето, преди да бъде освободено. Някои съединения се свързват толкова силно, че по същество никога не се отделят от зърната в колоната и никога не се измерват в разтвора, излизащ от колоната.
Типичните лабораторни техники за разделяне включват разработване на анализ или метод за разделяне и след това прилагане на този анализ за отделяне на отделни съединения от разтвор. Това обаче обикновено води до множество решения, които също трябва да бъдат подложени на процедури, което води до експоненциално увеличаване на сложността. Въпреки че HPLC често може да опрости и ускори този процес, разходите за разработване на HPLC апарат могат да станат огромни. Разработването на HPLC апарат, макар и много по-ефективно, е много по-скъпо от разработването на други анализи за разделяне на съединения. Това го прави финансово нежизнеспособен за много малки частни лаборатории.
HPLC не се използва само за разделяне на прости съединения, той се използва и за изолиране на специфични протеини от клетъчна смес. В този случай мънистата в колоната обикновено са покрити с антитяло, специфично за протеина, който трябва да съберете. Протеините свързват антителата и останалият разтвор се прекарва през колоната, след което протеините се освобождават с друг разтвор и се събират. Това изисква висококвалифициран техник да следи колоната по всяко време и да се увери, че процесът работи точно както е планирано.