Когато тествате ефекта на рН върху ензимната активност, трябва да променяте рН. Можете обаче да направите това по добри или лоши начини. Имайте предвид какви допълнителни фактори могат да объркат ефекта от променливото pH. В противен случай получените резултати може да не се дължат на промяната в рН, а на някакъв друг фактор. Знанието как правилно да варирате pH и какви фактори объркват pH на експеримента ще ви помогне да постигнете добри резултати и да разберете защо резултатите ви може да не са точно това, което сте очаквали.
Променете само едно нещо
Когато тествате ефекта на рН върху ензимната активност, променяйте само рН, като същевременно поддържате други фактори постоянни. Тези други фактори включват ензимна концентрация, концентрация на субстрата и температура. Факторите, които остават постоянни, се наричат контролни променливи. Контролните променливи ви позволяват да заключите, че резултатите от ензимната активност, получени във вашия експеримент, се дължат на променливата на pH, независимата променлива. Познаването на факторите, които не трябва да се променят в експеримента, е също толкова важно, колкото и знанието кой фактор да варира, в противен случай ще бъде трудно да се заключи дали резултатите всъщност се дължат на едно нещо, което е било тествани.
Изберете една киселина или една основа
РН на разтвора може да се промени чрез разтваряне на различни количества киселина или основа във вода. Един от начините за тестване на ефекта на рН върху ензимната активност е постепенното добавяне на капки силна киселина или силна основа в разтвора, който съдържа ензима, и след това наблюдавайте точката, в която ензимната активност се забавя или спира. Киселината се определя като съединение, което дарява водороден йон, наречен протон (Н +), а основата се определя като съединение, което дарява хидроксиден йон (-OH). Различните киселини и основи имат различен брой протони или хидроксидни йони, които трябва да се отделят. Не всички протони или хидроксидни йони се даряват веднага, когато към разтвор се добавят киселина или основа, но броят на дарените протони или хидроксидни йони променя рН с различна скорост. Поради това е добра идея да се променя pH в ензимен експеримент, като се използва само един вид киселина или един вид основа. В противен случай други променливи се добавят неволно.
Тъканите също променят pH
Някои лабораторни експерименти, които изследват ензимната активност, включват смилане на прясна тъкан за освобождаване на ензимите от клетките и след това добавяне на субстрат за измерване на ензимната активност. Прясната тъкан съдържа кръв. Поради наличието на ензими в кръвта, които променят въглеродния диоксид, който се разтваря в кръвта във въглеродна киселина, самата тъкан може да повлияе рН. По този начин, в експерименти, които включват ензимна активност в прясна тъкан, е полезно да се измие кръвта в чаша със студена вода, преди да се смила тъканта. Това ще сведе до минимум неволната промяна на рН, дължаща се на тъканта, така че да може да се изследва целенасочената промяна на рН.
Запазете същите размери
Както беше обсъдено по-горе, ензимната концентрация е контролен фактор, който не трябва да варира при тестване на ефекта на рН върху ензимната активност. Въпреки това, експерименталните процедури все още по същество променят концентрацията на ензима по фини начини. Ако човек използва чист ензимен разтвор, поддържането на ензимната концентрация е постоянно. При експерименти, при които ензимът е от прясна тъкан, като парчета картофи, парчета растения или парчета черен дроб, размерът на парчетата променя количеството ензим във всяка епруветка. По този начин ще бъде полезно да изрежете парчетата тъкан възможно най-равномерно. Това е още един пример за това как знанието какво да не се променя и защо е трудно да не се избегне промяната напълно, помага да се интерпретират резултатите от промяна на фактор като pH.