Начертайте диаграма на концентрацията на продукта спрямо времето за данните от първата епруветка на ензимния анализ. Забележка: хоризонталната ос трябва да е „време“, а вертикалната ос трябва да бъде „концентрация на продукта“.
Изчислете линейната регресионна линия за точките с данни, които сте начертали в Раздел 1, Стъпка 1. Докато Excel и графичните калкулатори могат лесно да определят този линеен модел, можете да извлечете оценка на регресията наклон на линията чрез разделяне на разликата в концентрацията на продукта между съседни точки с данни на тяхната разлика във времето.
Запишете наклона на линейната регресионна линия от Раздел 1, Стъпка 2 като "начална скорост на реакцията (Vo)." Забележка: в модела на регресионната линия "[концентрация на продукта] = m [време] + b", коефициентът "m" е наклон.
Повторете стъпки 1, 2 и 3 за останалите епруветки в анализа.
Начертайте обратната концентрация на субстрата за всяка епруветка спрямо обратната на първоначалната скорост на реакцията (от раздел 1, стъпка 4). Например, ако първоначалната скорост за епруветка с начална концентрация на субстрата от 50 микромолара (uM) е 80 uM / s, инверсите ще бъдат 1/50 uM за концентрацията на субстрата и 1/80 uM / s за първоначалната скорост. Забележка: обратната концентрация на субстрата трябва да бъде върху хоризонталната ос, а обратната начална скорост трябва да бъде върху вертикалната ос.
Забележка: Концентрацията на субстрата трябва да бъде върху хоризонталната ос, а началната скорост на реакцията трябва да бъде върху вертикалната ос.
Определете линейната регресионна линия за диаграмата, която сте начертали в Раздел 2, Стъпка 1. Забележка: тъй като ще трябва да знаете у-пресечната точка за регресионната линия, трябва да въведете точките от Раздел 2, Стъпка 1 в Excel или графичен калкулатор и използвайте вграденото моделиране на регресия функционалност.
Разделете 1 на y-пресичане от линейната регресионна линия. Това ще ви даде стойността на обратната на Vmax, максималната скорост на реакцията за ензима. Забележка: ако моделът на линейна регресия приема формата "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + B", тогава стойността на "b" ще бъде y-пресечната точка. Разделете 1 на "b", за да изчислите обратното на Vmax.
Разделете 1 на резултата от раздел 2, стъпка 3, за да изчислите действителната стойност на Vmax.
Определете концентрацията на ензима в първоначалния анализ (вж. Суровите данни). Забележка: концентрацията на ензима е еднаква за всички епруветки; само концентрациите на субстрата варират в анализа.
Разделете Vmax (от раздел 2, стъпка 4) от ензимната концентрация (от раздел 2, стъпка 5). Резултатът е стойността на Kcat.
Базиран в Чикаго копирайтър, Анди Паскеси има богат опит в писането на автомобили (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), финансови услуги (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), клиенти за здравеопазване (Abbott) и потребителски стоки (Sony, Motorola, Knoll). Притежава бакалавърска степен по английски от Харвардския университет, но не се интересува от оксфордската запетая.