يستخدم الكيميائيون كروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء ، أو HPLC ، لفصل خلائط المركبات. بشكل عام ، تتكون الطريقة من حقن عينة في عمود حيث تختلط مع مذيب واحد أو أكثر. المركبات المختلفة تمتص أو "تلتصق" بالعمود بدرجات مختلفة ؛ وعندما يدفع المذيب المركبات عبر العمود ، يخرج أحد مكونات الخليط من العمود أولاً. تكتشف الأداة المركبات عند خروجها من العمود وتنتج مخطط كروماتوجرافي يتكون من مخطط مع وقت استبقاء على المحور السيني وشدة الإشارة من الكاشف على المحور ص. عندما تخرج المركبات من العمود ، فإنها تنتج "قمم" في مخطط الكروماتوغرام. بشكل عام ، كلما كانت القمم متباعدة وأضيق في الكروماتوجرام ، زادت الدقة. يعتبر العلماء دقة 1.0 أو أعلى لتمثيل فصل مناسب.
قم بقياس عرض قمتين متجاورتين في مخطط الكروماتوجرام من خلال ملاحظة مكان قيم المحور السيني عند قاعدة كل قمة. يمثل المحور السيني وقت الاستبقاء ، ويقاس عادةً بالثواني. وبالتالي ، إذا بدأت القمة عند 15.1 ثانية وانتهت عند 18.5 ثانية ، يكون عرضها (18.5 - 15.1) = 3.4 ثانية.
حدد أوقات الاستبقاء من خلال ملاحظة الوقت ، أي الموقع على المحور السيني ، الذي يتوافق مع مواقع الحد الأقصى للقمم. ستكون هذه القيمة عادةً في منتصف المسافة بين القيمتين المستخدمتين لحساب العرض في الخطوة 1. المثال الوارد في الخطوة 1 ، على سبيل المثال ، سيظهر بحد أقصى حوالي 16.8 ثانية.
احسب الدقة ، R ، بين قمتين من خلال:
R = \ فارك {RT_1-RT_2} {0.5 (W_1 + W_2)}
حيث RT1 و RT2 تمثل أوقات الاحتفاظ للقمتين 1 و 2 ، و W1 و2 تمثل عرض القمم المأخوذة في قواعدها. استمرارًا للمثال من الخطوتين 2 و 3 ، تعرض ذروة واحدة وقت استبقاء 16.8 ثانية وعرض 3.4 ثانية. إذا أظهرت الذروة الثانية وقت استبقاء قدره 21.4 ثانية بعرض 3.6 ثانية ، فإن الدقة ستكون:
R = \ frac {21.4-16.8} {0.5 (3.4 + 3.6)} = 1.3
الأشياء ستحتاج
- كروماتوجرام HPLC
- آلة حاسبة
