في الرحلان الكهربائي للهلام ، يتم فصل عينات الحمض النووي أو البروتينات - بناءً على الحجم عادةً - عن طريق تطبيق مجال كهربائي يتسبب في انتقالها عبر مادة هلامية. يعد استخدام الرحلان الكهربائي للهلام أمرًا روتينيًا في مختبرات الأبحاث الطبية الحيوية ويستخدم للإجابة على مجموعة متنوعة من الأسئلة المختلفة ، لذلك لا توجد طريقة عالمية لتحليل النتائج.
تقنيات مختلفة مثل النشاف الغربي ، النشاف الشمالي ، النشاف الجنوبي ، على سبيل المثال ، كلها تتضمن هلام الكهربائي.
إذا كنت تفعل هلام الاغاروز الرحلان الكهربائي لعينات الحمض النووي ، وهو النوع الأكثر شيوعًا من الإجراءات ، ستحتاج عادةً إلى القيام بأمرين على الأقل: 1) التمييز غير المصقول البلازميدات من المدخلات والبلازميدات المكسورة والبلازميدات المقطوعة و ، 2) تقدير حجم أجزاء الحمض النووي المختلفة باستخدام منحنى قياسي Excel أو آلة حاسبة.
تحقق من دفتر المعمل الخاص بك لتحديد العينات التي تم تحميلها في الممرات. عند تحميل الآبار للجيل الخاص بك ، يجب أن تكون قد لاحظت هوية كل ممر / عينة.
باستخدام المسطرة ، قم بقياس المسافة على صورتك من الآبار إلى صبغة التتبع ، والتي سوف قد سافر إلى أبعد من أي من نطاقات الحمض النووي (بمعنى آخر ، سيكون في الجزء السفلي من هلام). سجل هذا الرقم - الوحدات التي تستخدمها ليست مهمة.
قم بقياس المسافة على صورتك من الآبار إلى كل شريط في "السلم" ، ثم اقسم تلك المسافة على المسافة التي يقطعها تتبع الصبغة حافظة مسافة. يمنحك هذا الحساب التنقل النسبي لكل نطاق.
مثال: لنفترض أن شريط صبغ التتبع قد تحرك 6 بوصات ولدينا ثلاث نطاقات تتحرك 5 و 4.5 و 3.5 بوصات.
ما هي حركتهم النسبية؟ الإجابة: نقسم 5 و 4.5 و 3.5 على 6 للحصول على قابلية تنقل نسبية تبلغ 0.833 و 0.75 و 0.5833.
تمنحك الشركة المصنعة حجم كل جزء في السلالم التي توفرها ، لذلك يجب أن تكون لديك هذه المعلومات بالفعل.
استخدم وظيفة خط الاتجاه في برنامج جدول البيانات لتلائم معادلة مع البيانات. يجب أن تكون هذه المعادلة معادلة قوة (على سبيل المثال x ^ -2) ويجب أن تناسب البيانات جيدًا نسبيًا (معامل R 0.9 على الأقل). هذا يخلق منحنى ومنحنى قياسي اكسل.
تذكر أن شظايا الحمض النووي الأصغر تنتقل عبر الهلام أكثر من شظايا الحمض النووي الكبيرة ، لذا فإن الأجزاء الأقرب إلى صبغة التتبع ستكون الأصغر. لاحظ ، مع ذلك ، أنه إذا بلازميد (دائري) الحمض النووي غير مقطوع ، سيصبح "ملفوفًا للغاية" أو ملتويًا مثل سلك الهاتف ، مما يؤدي في الواقع إلى انتقاله أبعد من الحمض النووي الخطي من نفس الحجم.
وبالمثل ، فإن البلازميد "المكسور" الذي تم قطعه بشكل غير كامل سوف يسافر أ أقصر المسافة من الحمض النووي الخطي من نفس الحجم. وبالتالي ، لا يمكنك تقدير حجم البلازميدات غير المقطوعة من الجل الخاص بك.
قم بمطابقة النطاقات في كل حارة بهوية العينة التي قمت بتحميلها في ذلك الممر وحدد ما إذا كان ما تراه هو ما كنت تتوقعه. هذا سوف يعتمد على طبيعة تجربتك.
بشكل عام ، ومع ذلك ، إذا قمت بهضم إدخال بلازميد مع اثنين من الإنزيمات التقييدية ، فستتوقع أن يتم تحرير الملحق من البلازميد.
نظرًا لأنه أصغر بكثير من البلازميد ، فمن المتوقع أن ترى شريطين في ذلك الممر ، أحدهما بالقرب من الأعلى والآخر لأسفل بالقرب من القاع. يجب أن يشكل قطع البلازميد الذي يحتوي على إنزيم تقييد واحد فقط نطاقًا واحدًا ينتقل إلى مسافة أبعد قليلاً من قطع البلازميد بقطعتين أنزيمات التقييد، ولكن ليس بالقرب من الملحق.
قم بقياس المسافة من الآبار إلى البلازميد المقطوع وأدخل العصابات باستخدام المسطرة. قسّم هذه الأرقام على المسافة التي تقطعها صبغة التتبع لإيجاد التنقل النسبي للإدخالات وقطع البلازميدات.