عيوب النشاف الغربي

النشاف الغربي هو أحد أكثر الإجراءات شيوعًا في مختبرات الكيمياء الحيوية. في الأساس ، يفصل البروتينات عن العينة حسب الحجم ، ثم يختبر باستخدام الأجسام المضادة لتحديد ما إذا كان هناك بروتين معين. إنه مفيد ليس فقط في البحث ولكن أيضًا في المختبرات الطبية أو التشخيصية ؛ اختبارات فيروس نقص المناعة البشرية ومرض لايم ، على سبيل المثال ، تتضمن اختبار مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) ، تليها لطخة غربية إذا كانت اختبارات ELISA إيجابية. على الرغم من شعبيته ، إلا أن النشاف الغربي له عيوب عديدة.

البقع الغربية الكلاسيكية غير كمية. بعبارة أخرى ، في حين أنهم يستطيعون إخبار الباحثين بوجود بروتين معين ، إلا أنهم لا يجعلون من الممكن تحديد كمية البروتين الموجودة. تبيع بعض شركات التكنولوجيا الحيوية الآن أطقمًا تمكن الباحثين أو فنيي المختبرات من تحديد الكمية يوجد البروتين باستخدام منحنى قياسي - ولكن هذا لا يعمل إلا إذا كانت العينات النقية من نفس البروتين موجودة متوفرة. علاوة على ذلك ، لا يمكن تقدير الوزن الجزيئي للبروتين إلا باستخدام النشاف الغربي ، بدلاً من تحديده بدقة كما هو الحال مع مقياس الطيف الكتلي.

لا يمكن إجراء لطخة غربية إلا إذا توفرت الأجسام المضادة الأولية ضد البروتين المعني. بينما تتوفر الأجسام المضادة للعديد من البروتينات المختلفة من شركات التكنولوجيا الحيوية ، إلا أنها ليست رخيصة ؛ إذا كانت الأجسام المضادة الأولية غير متوفرة لبروتين معين ، فلن يكون من الممكن إجراء لطخة غربية للبحث عن هذا البروتين المعين. علاوة على ذلك ، قد يرغب الباحثون في تحديد ما إذا كان البروتين قد تم تعديله بطريقة ما - إذا كان قد تمت فسفرته (كان لديه مجموعة الفوسفات المرتبطة به) ، على سبيل المثال - ومع تقنية لطخة ويسترن ، يحتاجون إلى أجسام مضادة خاصة بالمادة المعدلة بروتين.

قد يكون من الصعب إجراء لطخة غربية بشكل صحيح والحصول على نتائج جيدة ، لذلك يجب أن يكون الموظفون مدربين جيدًا. في هذا كما في كثير من الأمور الأخرى ، ربما تكون الخبرة هي أفضل معلم ؛ حتى بالنسبة للفني المتمرس ، فإن لطخة غربية تستغرق وقتًا طويلاً. على سبيل المثال ، سوف يستغرق جزء الفصل الكهربائي للهلام من التجربة ، عادةً من ساعة إلى ساعتين للتشغيل. يمكن إجراء مهام أخرى أثناء تشغيل الجل ، بالطبع ، لكن التجربة لا تزال تستغرق بعض الوقت للحصول على النتائج.

قد تظهر الأجسام المضادة في بعض الأحيان بعض الارتباط خارج الهدف ، مما قد يؤدي إلى نتائج أسوأ. علاوة على ذلك ، مع النشاف الغربي ، فإنك تستخدم جسمًا مضادًا ضد بروتين معين ، لذلك ستخبرك نتائجك فقط إذا كان هذا البروتين موجودًا. على النقيض من ذلك ، يكشف مقياس الطيف الكتلي عالي الدقة عن جميع البروتينات الموجودة في العينة ، وعلى عكس النشاف الغربي الكلاسيكي ، فهو كمي. من المهم أن نتذكر ، بالطبع ، أن مقياس الطيف الكتلي أغلى ثمناً وأكثر تحديًا تقنيًا في الاستخدام مقارنة بالنشاف الغربي.