الرحلان الكهربائي للهلام دوديسيل كبريتات - بولي أكريلاميد (SDS-PAGE) هو طريقة كيميائية حيوية لتحديد البروتينات في المحلول. كما أوضح ماثيوز وآخرون في "الكيمياء الحيوية" ، يتم أولاً تحميل عينات البروتين في "آبار" أو ثقوب على أحد طرفي كتلة هلام بولي أكريلاميد. ثم يتم تطبيق مجال كهربائي على الجل. يبطل SDS ، المضاف إلى العينات المحملة ، الشحنة الطبيعية للبروتينات. لهذا السبب ، يحدد الوزن الجزيئي للبروتين وحده سرعة هجرة البروتينات أثناء تحركها عبر الهلام باتجاه القطب الموجب الشحنة ، يلاحظ Bitesize Bio. وبالتالي ، فإن البروتينات المتعددة في نفس العينة ستنفصل عن بعضها وتهاجر إلى مواقع مختلفة.
وجّه صورة الهلام. "الجزء العلوي" هو موقع الآبار حيث تم إضافة العينات في الأصل. "الجزء السفلي" هو المكان الذي انتقلت إليه العينات وغالبًا ما يحتوي على واجهة الصبغة التي تشير إلى الجزء الأمامي المهاجر للعينات. يجب أن يحتوي اليسار أو اليمين على "علامة" تستخدم كدليل للوزن الجزيئي يمكن التنبؤ به.
قم بتسمية العينات لكل حارة. عبر الجزء العلوي ، ستكون العينات المضافة إلى الآبار قد هاجرت عموديًا في "ممرات". لذلك ، فإن جميع الأشرطة المرئية في عمود رأسي جاءت من عينة واحدة تم تحميلها فوقها مباشرة. استخدم المسطرة والقلم لوضع حدود على الممرات إذا كان من الصعب تصور الأعمدة.
قم بتسمية الأحجام الجزيئية للعصابات في حارة العلامة. تأتي العلامات المتاحة تجاريًا مع صورة لنمط النطاق المتوقع جنبًا إلى جنب مع الأوزان الجزيئية لكل نطاق. العصابات هي "القضبان" الأفقية المظلمة ، وهي في الواقع عبارة عن بروتين ملطخ مدمج في الهلام.
ارسم خطوطًا أفقية خفيفة تمتد من كل شريط علامة إلى الحافة المقابلة للجيل. كن حذرًا لجعل هذه الخطوط موازية للآبار ولواجهة الصبغ. تشير هذه الخطوط إلى مكان وجود بروتينات الوزن الجزيئي المشار إليها بواسطة كل من نطاقات العلامة في كل ممر. على سبيل المثال ، يمتد نطاق في الممر 4 أسفل الخط مباشرة من 25 كيلودالتون تشير الفرقة المحددة إلى أن نطاق الممر 4 يكاد يكون 25 كيلودالتونًا جزيئيًا ولكن ليس تمامًا وزن.
قم بتسمية كل شريط في كل حارة بالوزن الجزيئي المقدر. استخدم العلامات كدليل ، وقم بتقدير القيم بين أحجام العلامات.
أسفل الصورة الهلامية ، ضع قائمة "بالبروتينات" لكل ممر. ابدأ بذكر ما هو معروف عن كل عينة ، مثل أصلها أو ظروفها. ثم ضع قائمة بالوزن الجزيئي المقدر لكل نطاق في الممر. تشير الممرات ذات الشريط الواحد إلى أن العينة تحتوي على بروتين واحد فقط. تشير الممرات ذات العصابات المتعددة إلى وجود بروتينات متعددة. النطاقات التي تعمل مع مقدمة الترحيل أصغر من التي تقترحها أقرب علامة ومن المحتمل أنه لا يمكن توقعها إلا إذا كانت "أصغر من" تشير إلى العلامة.
في قائمة البروتينات ، لاحظ الشذوذ. يمكن أن يشير المظهر "الملطخ" إلى وجود عدد كبير جدًا من البروتينات أو أن لزوجة العينة أثرت على هجرتها. حافة الممر أو كبيرة جدًا مقارنة بالعصابات الأخرى ، فمن المحتمل أن يكون تركيز هذا البروتين مرتفعًا جدًا ويجب تخفيفه في المستقبل الكهربائي. يشير اللون الرمادي في جميع أنحاء الممر ، أغمق من لون هلام الخلفية ، إلى أجزاء بروتين لا يمكن تمييزها.
حدد هوية البروتينات في كل حارة. على الرغم من أن هذا يتم باستخدام الوزن الجزيئي فقط ، فمن المحتمل أن يشير مصدر كل حارة إلى أدلة أيضًا. ضع في اعتبارك أنه في ظل بعض الظروف ، يمكن للبروتينات الحفاظ على ترابط ثنائي أو تريمر في مادة هلامية. لذلك ، قد يظهر بروتين واحد على مادة هلامية على شكل ثلاثة نطاقات متميزة. حتى لو لم يمكن التعرف على البروتينات ، فإن الظلمة النسبية للعصابات يمكن أن تشير إلى تركيزات البروتينات في المحلول. يمكن عزل أي بروتينات غريبة وغير معروفة مباشرة من الجل الأصلي وإرسالها للتعرف عليها.
الأشياء ستحتاج
- صورة هلام SDS-PAGE ، ملطخة
- مفتاح لعلامة الوزن الجزيئي المستخدمة
- مسطرة
- قلم جاف