الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) هي تقنية معملية تستخدم لفصل وتحديد المركبات. إنه نوع من كروماتوغرافيا العمود الذي يعتمد على استقطاب مختلف للمركبات في محلول من أجل فصلها. يختلف HPLC عن كروماتوغرافيا العمود القياسي لأنه يستخدم الضغط لإجبار المحلول عبر العمود بسرعة أكبر ، وبالتالي ينتج عنه نتائج أسرع وأحيانًا أكثر دقة. الهدف هو فصل المركبات في العمود وجعلها تخرج بشكل منفصل.
نظرًا لسرعة HPLC واعتماده على الأقطاب المختلفة للمركبات المكونة من مركبين يمكن للبنية والأقطاب المتشابهة الخروج من جهاز الكروماتوغرافيا في نفس الوقت أو في نفس الوقت تقريبًا زمن. هذا هو المعروف باسم coelution. يجعل Coelution من الصعب تحديد أي جزء من الخليط يتم استخراجه عند أي نقطة.
يستخدم HPLC عادةً عمودًا زجاجيًا مملوءًا بخرز مصنوع من مواد مختلفة. تحتوي المخاليط التي يتم دفعها عبر العمود على مواد كيميائية ترتبط بقوة مختلفة بالخرز. تحدد قوة الارتباط ، التي تعتمد على التشابه في القطبية ، المدة التي سترتبط بها المادة الكيميائية بالخرز قبل إطلاقها. ترتبط بعض المركبات بشدة بحيث لا يتم إطلاقها أبدًا من الخرزات الموجودة في العمود ولا يتم قياسها مطلقًا في المحلول الخارج من العمود.
تتضمن تقنيات الفصل المختبرية النموذجية تطوير مقايسة ، أو طريقة فصل ، ثم تنفيذ هذا الاختبار لفصل المركبات الفردية عن المحلول. ومع ذلك ، يؤدي هذا عادةً إلى حلول متعددة تحتاج أيضًا إلى الخضوع لإجراءات ، مما يؤدي إلى زيادة هائلة في التعقيد. على الرغم من أن HPLC يمكنه في كثير من الأحيان تبسيط هذه العملية وتسريعها ، إلا أن تكلفة تطوير جهاز HPLC يمكن أن تصبح هائلة. تطوير جهاز HPLC ، على الرغم من أنه أكثر كفاءة بكثير ، إلا أنه أكثر تكلفة بكثير من تطوير فحوصات أخرى لفصل المركبات. هذا يجعلها غير مجدية من الناحية المالية للعديد من المختبرات الصغيرة المملوكة للقطاع الخاص.
لا يستخدم HPLC فقط لفصل المركبات البسيطة ، بل يستخدم أيضًا لعزل بروتينات معينة من خليط خلوي. في هذه الحالة ، عادة ما تكون الحبيبات الموجودة في العمود مغطاة بجسم مضاد خاص بالبروتين الذي تحتاج إلى جمعه. ترتبط البروتينات بالأجسام المضادة ويتم تمرير المحلول المتبقي عبر العمود ، ثم يتم إطلاق البروتينات باستخدام محلول آخر ويتم تجميعها. يتطلب ذلك فنيًا من ذوي المهارات العالية لمراقبة العمود في جميع الأوقات والتأكد من أن العملية تعمل تمامًا كما هو مخطط لها.