Вченим і технічним працівникам часто потрібно розрахувати концентрацію клітин у суспензії. Наприклад, коли у пацієнта забирають кров у кабінеті лікаря, лабораторія може використовувати певні методи для визначення кількості білих кров’яних тілець у певному обсязі крові. Це дає лікареві багато інформації про стан здоров’я про її пацієнта, особливо про його імунну систему та про те, чи бореться він з інфекцією чи іншою хворобою. Такі тести можуть шукати багато інших клітин у крові, а також спинномозкову рідину та інші рідини в організмі, такі як кількість сперматозоїдів у спермі для цілей родючості. Вчені також розраховують концентрацію бактерій, дріжджів та інших мікроорганізмів у клітинах для численних цілей, починаючи від екологічних досліджень і закінчуючи промисловими технологіями. Одну з найпоширеніших технік також викладають на багатьох уроках біології в коледжі, і вона використовує пристрій, який називається лічильною камерою.
Перш ніж суспензія клітин може потрапити в лічильну камеру, їй може знадобитися розведення, оскільки вона може містити тисячі або мільйони клітин. У такому випадку клітини неможливо розумно порахувати. Для розведення зразка за допомогою стерильної піпетки помістіть десять мікролітрів клітинного розчину в пробірку, що містить 90 мікролітрів розчинника. Тип розріджувача буде залежати від типу клітини. Добре перемішайте. Зараз цей розчин у десять разів більше розбавляється, ніж вихідний зразок, тому його коефіцієнт розведення становить 10
-1. Позначте це. Повторіть це кілька разів, використовуючи стерильну піпетку щоразу, поки розчин не розведеться досить. Якщо ви розбавили його вдруге, друга пробірка була в 100 разів більше розведеною, ніж початковий розчин, тож коефіцієнт розведення становив 10-2 і так далі.Можливо, вам доведеться спробувати кілька розведень, щоб визначити правильний коефіцієнт розведення для лічильної камери. Лічильна камера - це, в основному, дуже маленька, прозора прямокутна коробка з точною глибиною та точною сіткою, вписаною у верхню частину. Він також відомий як гемоцитометр, а іноді і гемацитометр. Мета полягає в тому, щоб суспензія була достатньо розведеною, щоб при перегляді в лічильній камері жодні клітини не перекривались і вони розподілялись по всій сітці рівномірно. Піпетуйте розведену суспензію, що містить клітини, у лунку в лічильній камері, де вона осідає в сітковій камері під дією капіляра. Помістіть лічильну камеру на сцену мікроскопа і розгляньте її з низькою потужністю.
Сітка містить квадрати, які зроблені з ще менших квадратів. Виберіть приблизно чотири або п’ять квадратів, або скільки вам потрібно, щоб нарахувати принаймні 100 клітинок за обраним вами шаблоном, таким як чотири кути та центральний квадрат. Якщо комірки великі, це можуть бути великі квадрати, але якщо комірки маленькі, ви можете замість них вибрати менші квадрати.
Конкретний об'єм кожного квадрата сітки може змінюватися залежно від виробника камери, але часто глибина камери становить 0,1 міліметрів, площа великих квадратів становить 1 квадратний міліметр, а площа менших квадратів - 0,04 квадратних міліметри. Тож більші квадрати мають об’єм 0,1 кубічного міліметра. У цьому прикладі припустимо, що ви нарахували загалом 103 клітини в п’яти квадратах і що ви розбавляли початкову пробу, поки коефіцієнт розведення не становив 10-2.
Якщо кожен квадрат сітки має об'єм 0,1 кубічних міліметрів і було підраховано п'ять, то загальний об'єм камери, що була підрахована, становив 0,5 кубічних міліметрів, і було 103 комірки. Удвічі зробивши 1 кубічний міліметр, це зробить 206 клітин. Один кубічний сантиметр еквівалентний 1 мілілітру, що є корисним виміром для рідин. У кубічному сантиметрі є 1000 кубічних міліметрів. Отже, якби був кубічний сантиметр або мілілітр суспензії, ви нарахували б 206 000 (206 х 1000) клітин. Ось як це виглядає як рівняння:
Об’єм квадрата сітки × кількість підрахованих квадратів = загальний об’єм підрахованої суспензії
Кількість клітин ÷ об’єм підрахованої суспензії = кількість клітин на міліметри в кубі
Кількість клітин на міліметри в кубі × 1000 = кількість клітин на мілілітр
Вам потрібно буде врахувати будь-яке розведення, проведене, щоб зробити початковий розчин підрахованим під мікроскопом. У цьому прикладі коефіцієнт розведення становить 10-2. Для розрахунку початкової концентрації розчину:
Кількість клітин на мілілітр ÷ коефіцієнт розведення = Концентрація клітин
У цьому прикладі кількість клітин на мілілітр становить 206000, і ділимо це на 10-2 (0,01) дає концентрацію клітин 20 600 000 клітин на мілілітр у вихідній пробі.