Розрахунок титру вірусу - це складний спосіб сказати, що вчений підраховує кількість вірусів у певній пробі. Для розрахунку титрів вірусів вчені заражають пластини зростаючих бактерій вірусними розчинами при різних концентраціях і з’ясувати кількість вірусів у вихідному розчині, підрахувавши бактерії, які загинули внаслідок вірусу інфекція.
Надіньте рукавички, заповніть 10 пробірки з культурами 9 мл відвару та позначте їх як "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" і так до "10 ^ -10". Ці пробірки будуть використовуватися для вірусного серійного розведення, що використовується для розрахунку фагу титр. Оскільки віруси можуть зростати до неймовірно високих концентрацій, вам потрібно розбавляти їх, щоб ефективно рахувати. Кожна пробірка являє собою десятикратне розведення вірусу.
Візьміть 1 мл змішаної культури з вашої пробірки з написом «10 ^ -1» і перенесіть її за допомогою нової піпетки в наступну пробірку, позначену як «10 ^ -2». Змішайте і цю пробірку.
Продовжуйте цю схему, щоб створити серійну серію розведення. У підсумку ви отримаєте 9 пробірок по 9 мл і 1 пробірку по 10 мл. Вірусні навантаження у ваших пробірках будуть розбавлені десь у 10 разів (перша трубка) або 100 разів (друга трубка) до десяти мільярдів разів (остання трубка).
Додайте до свого агару дві краплі бактеріального посіву і обережно перемішайте. Це ті бактерії, які будуть вбиті, що дозволить вам підрахувати кількість частинок вірусу в певному розчині.
Додайте по 1 мл кожного серійного розведення у відповідну агарову пробірку, поки пробірки все ще знаходяться на бані з гарячою водою. Наприклад, 1 мл вашого 10 ^ -1 серійного розведення повинен надходити в агарову пробірку з написом «10 ^ -1».
Змішайте кожну пробірку, а потім вилийте кожну пробірку в пластинку Петрі з відповідною етикеткою. Це створить тонкий шар агару, який посів бактерії та віруси в кожну пластину. Нехай пластинки ростуть протягом ночі в інкубаторі.
Дістаньте тарілки з інкубатора і огляньте їх. Ви повинні побачити похмурі ділянки по всій пластині, де росли бактерії, за винятком невеликих прозорих плям, які називаються бляшками. Ці бляшки є плямами мертвих бактерій, і кожен наліт являє собою один вірус.
Візьміть кількість бляшок на тарілці і помножте на 10. Якби ви нарахували 157 табличок, то отримали б 1570.
Помножте число, отримане на попередньому кроці, на обернене до числа на вашому розчиннику пробірці. Наприклад, якщо вибраною вами пластиною була 10 ^ -5, ви помножите 1570 на 10 ^ 5, щоб отримати 157000000. Це остаточне число є вашим титром фагів і представляє кількість вірусів на мл вашої вихідної культури.