Клонування ТА - простий і зручний метод субклонування продуктів полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). "ТА" - це скорочення від "тимін" і "аденин". Ця техніка клонування використовує здатність тиміну гібридизуватися з аденином у присутності лігаз. Ферменти обмеження не використовуються, на відміну від традиційного методу субклонування. Натомість, продукти ПЛР ампліфікуються за допомогою ферментів полімераз Taq.
Метод
Метод клонування ТА використовує кінцеву трансферазну активність певного виходу дезоксирибонуклеїнової кислоти до кожного кінця продукту ПЛР.
Для клонування цього продукту ПЛР у плазмідний вектор використовується лінеаризований вектор клонування з одиночними, трьома виступами простих Т (3'-Т), що називається Т-вектором. Продукт ПЛР змішується з цим вектором у високій пропорції.
ДНК-лігаза (Т4-лігаза) додається до суміші, що дозволяє цим продуктам гібридизуватися та приєднуватися.
Переваги і недоліки
Клонування ТА - це зручний метод субклонування продуктів ПЛР у лінеаризованому векторі, і він набагато простіший і швидший, ніж традиційні методи субклонування. Оскільки цей метод не використовує рестрикційні ферменти, продукти без сайтів ферментів рестрикції можуть бути клоновані.
Недоліком є те, що набори для клонування ТА дуже дорогі, і, отже, їх використання обмежене. Крім того, немає спрямованого клонування; тому ймовірність клонування в протилежному напрямку більша.
Набори для клонування TA
Кілька виробників продають набори для клонування ТА. Деякі з них - Invitrogen, QIAGEN та Premier Biosoft.