Мікробіолог використовує хітинове фарбування, щоб вона чітко бачила грибки під мікроскопом. Гриби використовують хітин як структурний матеріал у своїх клітинних стінках, тому пляма добре показує клітинну стінку. Лактофенольний бавовняний синій пляма є найпоширенішим плямою для грибків. Фенол вбиває мікроорганізми і не дає грибковим ферментам розщеплювати клітину. Бавовняно-синій барвник перетворює хітин у синій. Фарбування хітином є відносно простою процедурою з недорогими матеріалами. Ви можете зробити власний барвник або придбати комерційно приготовлену пляму.
Приготуйте розчин лактофенолу бавовняно-синього кольору. Зважте 0,05 грама бавовняно-синього барвника за допомогою чутливої ваги. Змішайте барвник з 20 мілілітрами дистильованої води в пробірці і залиште на ніч.
Одягніть рукавички перед тим, як закінчити підготовку плям наступного дня. Помістіть 20 мл молочної кислоти в склянку та змішайте її з 20 г кристалів фенолу. Перемішувати, поки суміш не розчиниться. Додайте 40 мл гліцерину і перемішайте. Потім процідіть бавовняно-синій розчин через шматочок фільтрувального паперу в склянку і ретельно перемішайте.
В якості альтернативи використовуйте комерційно підготовлене джерело плями. Зберігайте пляму при кімнатній температурі.
Позначте предметне скло мікроскопа ідентифікаційним іменем або номером зразка. За допомогою однієї стерильної крапельниці покладіть одну краплю зразка води в центр предметного склянки мікроскопа. Для сухого зразка покладіть одну краплю 70-процентного спиртового розчину на предметне скло, а потім за допомогою стерильної петлі змішайте суху пробу зі спиртом.
За допомогою чистої крапельниці перенесіть дві краплі лактофенольного бавовняного плями на центр предметного стекла. Якщо ви використовуєте 70% алкоголю на предметному склі, зробіть це до того, як спирт випарується з предметного скла.
Доторкніться одним краєм ковзання мікроскопа до одного краю мокрого препарату для зразків. Нехай накладка м’яко потрапляє на препарат для зразка, гарантуючи, що під слайдом не буде затримано бульбашок повітря. Тепер пофарбований зразок готовий до дослідження під мікроскопом.