Одним із класичних способів визначення концентрації мікробів у зразку є розведення проби, вирощування мікробів на пластинах та підрахунок колоній. Покриті мікробами виростають з колонієутворюючої одиниці, що складається з однієї або декількох клітин, у видиму колонію, яку можна побачити і порахувати. Бактерії - найпоширеніший мікроб для оцінки за допомогою кількості пластин. Кількість колоній використовується для виявлення та підрахунку мікробів у ґрунті, воді та їжі. Протоколи підрахунку колоній підкреслюють точний і методичний підхід.
Розведення зразків, покриття та інкубація
Якщо просто намазати зразок мікроба на агарову пластину, ви побачите стільки колонієутворюючих одиниць, що окремі колонії змішаються, що зробить їх неможливим для підрахунку. Щоб вирішити цю проблему, змішайте зразок у рідкому середовищі, візьміть невелику кількість цієї суміші та додатково розбавте її. Повторіть цей процес шість-10 разів. Нанесіть остаточне розведення на тарілку з агаром та інкубуйте його протягом чотирьох-семи днів, перш ніж підраховувати колонії.
Підрахунок вручну
Основна хитрість підрахунку колоній полягає в тому, щоб підрахувати кожну колонію один раз. Один із підходів полягає в тому, щоб встановити чашку Петрі на тлі сітки та підрахувати колонії в кожній клітині сітки, рухаючись у методичному режимі через усі клітини. Позначення підрахованих колоній на звороті чашки Петрі також може бути корисним підходом. Як правило, вам потрібно буде нарахувати принаймні три тарілки; використовуйте лише пластини, що містять від 30 до 300 колоній, щоб робити надійні умовиводи, пропонує компанія Microbiology Network, фірма, яка надає консультаційні послуги лабораторіям та виробникам. Пластини з колоніями, яких занадто багато для підрахунку, або з занадто малою кількістю колоній, потрібно переплавувати з нового розведення.
Автоматизований підрахунок
Людська помилка збільшує час, затрачений на підрахунок колоній вручну. Для підвищення точності та ефективності помістіть чашку Петрі в автоматизований пристрій для підрахунку колоній. Автоматизовані лічильники колоній знімають блюдо, відокремлюють колонії від фону, а потім використовують алгоритм для підрахунку колоній на тарілці. Алгоритми можуть мати труднощі з диференціацією колоній, коли дві або більше колоній стикаються по краях, тому це область постійної розробки програмного забезпечення.
Робить підрахунок складнішим
Точність обчислення щільності мікробів за кількістю колоній має деякі обмеження. Колонієутворюючими одиницями можуть бути одинична клітина, ланцюг клітин або ціла група клітин. Припускають, що колонія являє собою одну клітину, тому концентрації, розраховані на підставі кількості колоній, можуть бути низькими. Різні мікроби потребують різних умов росту, і колонії на пластині представляють лише тих мікробів, які процвітають на цьому середовищі росту в цих умовах інкубації. Крім того, підрахунок колоній не реєструє мертвих клітин, що є важливим фактором, коли вам потрібна концентрація клітин у вихідній пробі.