Коли ви перевіряєте вплив рН на активність ферментів, вам слід змінювати рН. Однак ви можете зробити це хорошими чи поганими способами. Майте на увазі, які додаткові фактори можуть переплутати вплив змін рН. В іншому випадку отримані результати можуть бути зумовлені не зміною рН, а іншим фактором. Знання того, як правильно змінювати рН та які фактори збивають рН експерименту, допоможе вам отримати хороші результати та зрозуміти, чому ваші результати можуть бути не такими, як ви очікували.
Змінити лише одну річ
Випробовуючи вплив рН на активність ферментів, змінюй лише рН, підтримуючи постійно інші фактори. До цих інших факторів належать концентрація ферментів, концентрація субстрату та температура. Фактори, які залишаються постійними, називаються керуючими змінними. Контрольні змінні дозволяють зробити висновок, що результати щодо активності ферментів, отримані у вашому експерименті, зумовлені зміною рН, незалежною змінною. Знання факторів, які не слід змінювати в експерименті, є настільки ж важливим, як знання фактору, який змінюється інакше буде важко зробити висновок, чи результати насправді зумовлені тим, що було перевірено.
Виберіть одну кислоту або одну основу
РН розчину можна змінювати, розчиняючи у воді різну кількість кислоти або основи. Одним із способів перевірити вплив рН на активність ферментів є поступове додавання крапель сильної кислоти або сильної основи в розчин, що містить фермент, а потім спостерігають точку, в якій активність ферменту сповільнюється або зупинки. Кислота визначається як сполука, яка виділяє іон водню, що називається протоном (Н +), а основа - як сполука, яка виділяє гідроксид-іон (-ОН). Різні кислоти та основи мають різну кількість протонів або гідроксид-іонів, які потрібно віддавати. Не всі протони або гідроксид-іони негайно віддають, коли до розчину додають кислоту або основу, але кількість відданих протонів або гідроксид-іонів змінює рН з різною швидкістю. Таким чином, корисно змінювати рН в ферментному експерименті, використовуючи лише один тип кислоти або один тип основи. В іншому випадку ненавмисно додаються інші змінні.
Тканини також змінюють рН
Деякі лабораторні експерименти, що вивчають активність ферментів, включають подрібнення свіжої тканини для вивільнення ферментів з клітин, а потім додавання субстрату для вимірювання активності ферментів. Свіжа тканина містить кров. Через наявність ферментів у крові, які змінюють газ, що розчиняється в крові, у вуглекислоту, вуглекисла кислота, сама тканина може впливати на рН. Таким чином, в експериментах, які передбачають активність ферментів у свіжій тканині, корисно змити кров у склянці з холодною водою перед подрібненням тканини. Це дозволить мінімізувати ненавмисну зміну рН внаслідок тканин, щоб можна було вивчити цілеспрямовану зміну рН.
Зберігайте розміри однаковими
Як обговорювалося вище, концентрація ферментів є контрольним фактором, який не слід змінювати при тестуванні впливу рН на активність ферменту. Однак експериментальні процедури все ще по суті змінюють концентрацію ферментів тонкими способами. Якщо ви використовуєте чистий розчин ферментів, то підтримуйте концентрацію ферментів постійною. Однак у експериментах, в яких фермент отримує свіжу тканину, таку як шматочки картоплі, шматочки рослин або шматочки печінки, розмір шматочків змінює кількість ферменту в кожній пробірці. Таким чином, корисно буде вирізати шматочки тканини якомога рівномірніше. Це ще один приклад того, як знання того, що не слід змінювати, і чому важко не уникнути змін повністю, допомагає інтерпретувати результати варіації такого фактора, як рН.
