DNA örneklerini bir agaroz jel üzerinde çalıştırıp bir resim çektikten sonra, resmi daha sonra kullanmak üzere kaydedebilir, bu noktada sonuçları analiz edebilir ve yorumlayabilirsiniz. Aradığınız şeylerin türü, denemenizin doğasına bağlı olacaktır. Örneğin, DNA parmak izi alıyorsanız, iki örnekten DNA parçalarının boyutunu karşılaştırmak isteyeceksiniz - belki de şüpheliden ve suç mahalli örneğinden. Aksine, bakterilerden elde edilen plazmitlerle çalışıyorsanız, plazmitin eki içerdiğinden emin olmanız gerekebilir. Sonuç olarak, jelinizi nasıl yorumlayacağınız kısmen yaptığınız deneye bağlı olacaktır. Bununla birlikte, uygulayabileceğiniz bazı genel kurallar vardır.
Bu bölümdeki talimatları kullanmanız gerekebileceğini veya gerekmeyebileceğini unutmayın. Agaroz jel elektroforezi genellikle bir plazmitin belirli bir ek içerdiğini doğrulamak için kullanılır. Plazmitlerle çalışmıyorsanız bu bölümü atlayabilirsiniz. Ancak, iseniz, bu talimatları uygulayabilirsiniz.
Kesilmemiş veya çentikli plazmitlerle çalışıyorsanız, yukarıdaki 1. bölümdeki prosedürü kullanarak boyutu tahmin edemeyeceğinize dikkat edin. Bunun nedeni, kesilmemiş ve çentikli plazmitlerin lineer DNA'dan farklı hızlarda göç etmesidir.
Her şeritteki bant sayısını karşılaştırın. Bir kısıtlama enziminin, kısıtlama bölgesi adı verilen belirli bir dizinin meydana geldiği bölgelerde DNA'yı kestiğini hatırlayın. Bir numune İKİ kısıtlama enzimi ile muamele edilmişse, ek için bir bant ve plazmitin geri kalanı için bir bant mevcut olmalıdır. Bunun nedeni, ekin, her biri farklı bir enzim için olan iki kısıtlama bölgesi tarafından kuşatılmasıdır, bu nedenle bu bölgelerin her ikisindeki kesimler, eki plazmitten kurtaracaktır. Bunun aksine, sadece bir bölgede bir kesim, plazmidi lineer DNA'ya dönüştürecektir. O halde, restriksiyon enzimleri veya bir restriksiyon enzimi içermeyen bir numune kesimi tek bir bant içermelidir, iki restriksiyon enzimi ile kesilen bir numune iki bant içermelidir.
Çentikli plazmit DNA tarafından oluşturulan bantlara dikkat edin. Çentikli bir plazmitin yalnızca tek bir iplikte bir kesimi vardır, bu nedenle kesilmiş bir plazmitten daha yavaş göç eder. Kesilmiş plazmitler sırayla kesilmemiş DNA'dan daha yavaş göç eder.
Bölüm 1'de açıklanan prosedürü kullanarak ekin boyutunu tahmin edin ve beklentilerinize uyup uymadığını belirleyin (deneye bağlı olarak değişecektir).
İhtiyacınız Olan Şeyler
- Kalem
- Kağıt
- Tablolama programı
- Jelinizin resmi
- cetvel
