Bilim adamları, DNA'yı, örneğin bir kişiye genetik bir hastalığı olup olmadığını söyleyebilecek kurucu nükleotidlerine parçalayabilir veya sıralayabilir. DNA ekstraksiyonunun yaygın yöntemleri, işlemin bir adımında izopropanol veya etanol kullanımını içerir. Bununla birlikte, hücreler proteinler ve lipitler gibi birçok başka molekül içerir ve bilim adamları doğal olarak mümkün olduğunca saf bir DNA çözümü elde etmek isterler.
DNA ekstraksiyonu yöntemleri tipik olarak birkaç adımı içerir: hücrelerin kırılarak açılması gerekir, zar lipitlerinin çıkarılması ve DNA'nın proteinlerden, RNA'dan ve diğerlerinden ayrılması gerekir. kirleticiler. İki tipik protokol, bakteriyel plazmit DNA'sının ekstraksiyonu için alkalin liziz ve fenol-kloroform ekstraksiyonudur. Her iki yöntemde de, nükleik asitlerin etanol veya izopropanol ile çökeltilmesi, son adımlardan biridir. DNA veya RNA çökeltildiğinde (çözeltiden düştüğünde), su içinde yeniden süspanse edilebilir.
Etanol İyi Bir Çözücüdür
Hem etanol hem de izopropanol suyla iyi karışır (karışır), ancak dielektrik sabitleri sudan daha düşüktür, yani çözeltideki pozitif ve negatif yükleri koruma ve onları ayrı tutma yetenekleri çok fazladır. daha fakir. Örneğin su için dielektrik sabiti 78,5 iken etanol sabiti 24.3'tür. DNA negatif yüklüdür, bu nedenle çözeltideki potasyum veya sodyum gibi pozitif iyonlara çekilir. Etanol, pozitif yüklü iyonları ve DNA'yı ayrı tutmak için sudan daha zayıf bir yeteneğe sahiptir.
Etanol DNA Konsantrasyonunu Artırır
Etanol ayrıca başka bir nedenle DNA'yı daha az çözünür hale getirir. Etanol molekülleri, su molekülleri ile hidrojen bağları adı verilen etkileşimler oluşturabildikleri için, DNA'yı hidratlamak için mevcut su moleküllerinin sayısını azaltırlar. Bu etki ve düşük dielektrik sabiti arasında, etanol temel olarak DNA'nın çözeltideki pozitif iyonlarla bir araya gelmesine neden olarak tüpün dibinde bir katı veya çökelti oluşturur. Çözeltideki diğer kirleticiler aynı anda çökelmediği için DNA'nın çökeltilmesi onu daha konsantre hale getirmeye yarar.
Süreçteki Ek Faktörler
Etanol yıkama ayrıca tuzlar ve deterjanlar gibi düşük moleküler ağırlıklı kirleticilerin çıkarılmasına da hizmet eder. Seçilen tuz, sodyum dodesil sülfat (SDS) deterjanını daha önceki bir adımdan çöktürmenin gerekli olup olmadığına bağlı olarak değişebilir; örneğin potasyum dodesil sülfat çözünmezdir ve çökelecektir, bu nedenle bir alkalin lizis içinde potasyum asetat kullanılması, etanol/izopropanol eklenmeden önce SDS'yi çıkarabilir. Etanol, RNA'nın çökeltilmesi için tipik olarak daha fazla etanol gerektirse de, aynı nedenlerle RNA'yı çökeltmek için de kullanılabilir.