TA Klonlama Nedir?

TA klonlama, polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ürünlerini alt klonlamanın basit ve kullanışlı bir yöntemidir. "TA", "timin" ve "adenin"in kısaltmasıdır. Bu klonlama tekniği, timinin ligazların mevcudiyetinde adenine hibridize olma kabiliyetini kullanır. Geleneksel alt klonlama yönteminin aksine kısıtlama enzimleri kullanılmaz. Bunun yerine, PCR ürünleri Taq polimeraz enzimleri kullanılarak amplifiye edilir.

Yöntem

TA klonlama yöntemi, PCR ürününün her bir ucuna belirli deoksiribonükleik asit çıkıntısının terminal transferaz aktivitesini kullanır.

Bu PCR ürününü bir plazmit vektörüne klonlamak için, T-vektörü adı verilen tek, üç prime-T (3'-T) çıkıntısı olan doğrusallaştırılmış bir klonlama vektörü kullanılır. PCR ürünü bu vektör ile yüksek oranda karıştırılır.

Karışıma DNA ligaz (T4 ligaz) eklenerek iki ürünün hibritleşmesi ve birleşmesi sağlanır.

Avantajlar ve dezavantajlar

TA klonlama, doğrusallaştırılmış vektörde PCR ürünlerinin alt klonlanması için uygun bir yöntemdir ve geleneksel alt klonlama yöntemlerinden çok daha basit ve hızlıdır. Bu yöntemde kısıtlama enzimleri kullanılmadığından, kısıtlama enzimi bölgeleri olmayan ürünler klonlanabilir.

Bir dezavantaj, TA klonlama kitlerinin çok pahalı olması ve dolayısıyla kullanımlarının sınırlı olmasıdır. Ayrıca, yönlü klonlama yoktur; yani ters yönde klonlama olasılığı daha fazladır.

TA Klonlama Kitleri

Birkaç üretici TA klonlama kitleri satmaktadır. Bazıları Invitrogen, QIAGEN ve Premier Biosoft'tur.

  • Paylaş
instagram viewer