Jel elektroforezi, moleküler biyolojide DNA analizi için kullanılan başlıca yöntemlerden biridir. Bu yöntem, DNA parçalarının, boyut veya şekil temelinde ayrıldıkları bir jel yoluyla göçünü içerir. Bununla birlikte, jel elektroforezi gibi bilimsel olarak sağlam bir yöntem bile hatalara karşı bağışık değildir.
Elektroforez Nasıl Çalışır?
•••Jezperklauzen/iStock/Getty Images
Jel elektroforezi, genellikle agaroz gibi polimerlerden yapılmış bir jelin kullanımını içerir. Jel, elektrik alanı ileten bir tampon çözeltisine daldırılır. İlgili DNA numunesi önce kısıtlama enzimleri kullanılarak parçalanır ve daha sonra jele enjekte edilir. Elektrik alanı açıldığında, jeldeki DNA parçaları pozitif elektrota doğru hareket eder. DNA parçaları farklı boyutlardaysa, her boyuttaki parça için göç süreleri farklı olacaktır. Parçalar daha sonra bir boya veya otoradyografi kullanılarak görselleştirilir ve jelde bantlar olarak görünür.
Numunenin Kirlenmesi
•••aiaikawa/iStock/Getty Images
Elektroforezin başlıca uygulaması, moleküler biyolojide DNA analizi için bir araç olarak kullanılır, ancak aynı zamanda adli tıpta bir suç mahallinden örnekleri tanımlamanın bir aracı olarak kullanılır. Doğru sonuçlar elde etmek için bu teknikteki hata kaynaklarının en aza indirilmesi önemlidir. Bir hata kaynağı, DNA örneğinin kontaminasyonudur. Numunede yabancı DNA varsa, jel, yalnızca saflaştırılmış numuneyi içeren bir jelde bulunandan daha fazla banda sahip olacaktır.
Jel, Akım ve Tampon ile İlgili Sorunlar
•••IndiaImages/iStock/Getty Images
Hatalardan kaçınmak için jelin konsantrasyonu da doğru olmalıdır. Konsantrasyon çok yüksek veya çok düşükse, fragmanlar ya çok yavaş ya da çok hızlı göç edecektir. Bu, farklı bantların çözümlenmesinde hatalara yol açacaktır. Elektroforez çalışması sırasında voltajın sabit olmasına özen gösterilmelidir. Voltajdaki herhangi bir dalgalanma, DNA parçalarının kararsız bir şekilde göç etmesine neden olacak ve bu da bantların okunmasında hatalara yol açacaktır. Yanlış pH veya iyonik konsantrasyona sahip bir tampon, DNA parçalarının şeklini değiştireceğinden, aynı zamanda göç sürelerini de değiştireceğinden, tampon solüsyonu da doğru bileşimde olmalıdır.
Uygun Görselleştirme
•••Ingram Yayıncılık/Ingram Yayıncılık/Getty Images
En önemlisi, jel uygun şekilde görselleştirilmelidir. Numuneleri görselleştirmek için kullanılan boya veya radyoaktif probun konsantrasyonu çok yüksekse, kalan fragmanlar da görselleştirileceğinden ortaya çıkan görüntü çok dağınık olacaktır. Jel konsantrasyonu çok düşükse görselleştirme yapılmayacaktır. Tüm aşamalarda doğru süreçler izlendiğinde, jel elektroforezi doğru ve büyük güvenle kullanılabilecek sonuçlar verecektir. Tüm bilimsel prosedürlerde olduğu gibi, jel elektroforezi hatalara eğilimli olabilir, ancak bunlar uygun hazırlık ve kullanımla en aza indirilebilir.