Bir numunedeki mikrop konsantrasyonunu belirlemenin klasik yollarından biri, numuneyi seyreltmek, mikropları plakalar üzerinde büyütmek ve kolonileri saymaktır. Kaplanmış mikroplar, bir veya daha fazla hücreden oluşan bir koloni oluşturan birimden görülebilen ve sayılabilen görünür bir koloniye dönüşür. Bakteriler, plaka sayımlarını kullanarak değerlendirmek için en yaygın mikroptur. Koloni sayımları, toprak, su ve yiyeceklerdeki mikropları tespit etmek ve saymak için kullanılır. Kolonileri saymak için protokoller, doğru ve metodik bir yaklaşımı vurgular.
Numunelerin Seyreltilmesi, Kaplama ve İnkübasyon
Bir agar plakasına bir mikrop örneğini bulaştırırsanız, o kadar çok koloni oluşturan birim görürsünüz ki, tek tek koloniler birbirine karışır ve onları saymayı imkansız kılar. Bu sorunu çözmek için numuneyi sıvı bir ortama karıştırın, bu karışımdan küçük bir miktar alın ve daha da seyreltin. Bu işlemi altı ila 10 kez tekrarlayın. Son seyreltmeyi bir agar plakasına yayın ve kolonileri saymadan önce dört ila yedi gün inkübe edin.
Manuel Sayma
Kolonileri saymanın birincil püf noktası, her koloni noktasını bir kez saymaktır. Bir yaklaşım, Petri kabını bir ızgara arka planına ayarlamak ve tüm hücreler boyunca metodik bir modelde hareket ederek her ızgara hücresindeki kolonileri saymaktır. Sayılan kolonileri Petri kabının arkasına işaretlemek de yararlı bir yaklaşım olabilir. Genel olarak, en az üç tabak saymanız gerekecektir; Laboratuvarlara ve üreticilere danışmanlık hizmetleri sunan Microbiology Network, sağlam çıkarımlar yapmak için yalnızca 30 ila 300 koloni içeren plakaları kullanın. Sayılamayacak kadar çok koloni içeren veya çok az koloni içeren plakaların yeni bir dilüsyondan yeniden kaplanması gerekir.
Otomatik Sayma
İnsan hatası, kolonilerin manuel olarak sayılması için gereken süreye eklenir. Hem doğruluğu hem de verimliliği artırmak için Petri kabını otomatik bir koloni sayma cihazına yerleştirin. Otomatik koloni sayaçları yemeğin bir görüntüsünü alır, kolonileri arka plandan ayırır ve ardından plakadaki kolonileri saymak için bir algoritma kullanır. Algoritmalar, iki veya daha fazla koloni kenarlara dokunduğunda kolonileri ayırt etmekte zorluk çekebilir, bu nedenle bu, devam eden bir yazılım geliştirme alanıdır.
Saymayı Daha Karmaşık Hale Getirmek
Koloni sayımlarından mikrop yoğunluğunu hesaplamanın doğruluğu bazı sınırlamalara sahiptir. Koloni oluşturan birimler, tek bir hücre, bir hücre zinciri veya bütün bir hücre kümesi olabilir. Varsayım, bir koloninin bir hücreyi temsil etmesidir, bu nedenle koloni sayımlarından hesaplanan konsantrasyonlar düşük olabilir. Farklı mikropların farklı büyüme koşullarına ihtiyacı vardır ve plakadaki koloniler yalnızca bu inkübasyon koşulları altında o büyüme ortamında gelişen mikropları temsil eder. Ayrıca, koloni sayımı ölü hücreleri kaydetmez; bu, orijinal numunedeki hücre konsantrasyonuna ihtiyaç duyduğunuzda önemli bir husustur.